Aceite de inmersión: composición, características, usos
El aceite de inmersión es un líquido viscoso y transparente que tiene un alto índice refractivo. Por este motivo es muy utilizado en las observaciones microscópicas, ya que brinda la propiedad de concentrar la luz cuando esta pasa a través del objetivo de 100X del microscopio, aumentando su poder de resolución.
Esto ocurre debido a que se forma una película viscosa entre el objetivo y el frotis, impidiendo que los rayos de luz se dispersen al llegar al aire, logrando concentrar los haces de luz hacia la muestra.
El aceite de inmersión se usa únicamente con el objetivo de 100X. Es por ello que al objetivo de 100X se le llama también objetivo de inmersión. Al resto se les conoce como objetivos secos. Este objetivo no puede utilizarse sin el aceite de inmersión, pues sin este la visualización no sería satisfactoria.
La función principal del aceite de inmersión es brindar imágenes más claras, nítidas y definidas, permitiendo la observación de detalles que con otros objetivos no sería posible.
El primer aceite utilizado para este fin fue el aceite de anís, usado junto al primer lente de inmersión creado por Giovanni Battista Amici. Este solo evitaba la aberración cromática, pero no aumentaba la apertura numérica del sistema de lentes.
Luego se utilizó el aceite de cedro, pero presentó muchas desventajas que obligaron a su desuso. Entre ellas estaba su alta acidez, la cual dañaba los objetivos en un corto plazo.
Posteriormente, se usaron otras sustancias como el agua y la glicerina hasta que se crearon los aceites de inmersión sintéticos, que poco a poco fueron perfeccionándose hasta llegar al aceite de inmersión actual, el cual es un compuesto complejo de sustancias orgánicas.
Índice del artículo
- 1 Composición del aceite de inmersión
- 2 Características del aceite de inmersión
- 3 Fundamentos del aceite de inmersión
- 4 Usos o aplicaciones
- 5 Pasos para observar una preparación utilizando aceite de inmersión
- 6 Cuidados
- 7 Referencias
El aceite de inmersión está constituido por una mezcla de compuestos orgánicos tales como: terfenilo, terfenilo hidrogenado, hidrocarburos naturales y polibutenos.
El aceite de inmersión es un líquido de color amarillo claro, aspecto ligeramente viscoso, de olor característico y densidad entre 0,92 a 0,99 gr/cm3.
El aceite de inmersión no es soluble en agua, y posee un punto de ebullición de 340°C. El índice de refracción a (n 20°C/D): oscila entre 1,482 – 1,516. En tanto que, el índice de inflamación es de 110°C y la viscosidad oscila entre 100 a 120 mPa.s.
Este producto debe ser desechado de forma adecuada, ya que es ecotóxico. Es decir es dañino para el ambiente, afectando principalmente a los animales acuáticos. Por otra parte, es irritante de piel y mucosas. Si se ingiere es nefrotóxico y cardiotóxico.
El aceite de inmersión es estable a 15 a 25°C, temperatura a la que debe conservarse.
Al usar objetivos de mayor aumento se debe subir la intensidad de la luz. Sin embargo, muchos de los haces de luz se pierden porque son dispersados al llegar al aire (espacio entre el cubreobjeto y el lente), e incluso algunos rayos sufren una reflexión total.
El aceite de inmersión posee un índice de refracción similar al del vidrio. Por tanto, cuando se pone en contacto el aceite entre el lente de 100X y el cubreobjeto, los haces de luz se concentran.
Los rayos concentrados atraviesan la muestra y aumentan la nitidez de la imagen, es decir, aumenta la apertura numérica del objetivo y corrige las aberraciones cromáticas y esféricas.
El uso del aceite de inmersión se hace necesario especialmente cuando se requiere observar una imagen de una forma más amplia, utilizando para ello el objetivo de mayor aumento (objetivo de 100X) y así poder ver detalles que son esenciales para establecer un diagnóstico.
Por tanto, es ampliamente utilizado en estudios microscópicos de diversas áreas tales como: histología, citolología, hematología y bacteriología. Por ejemplo, es útil para el estudio de las características de las células y los tejidos de un paciente.
También sirve para el análisis de frotis sanguíneos, donde se quiere detallar características de hemoparásitos dentro y fuera de los eritrocitos, así como en las preparaciones de Gram, para definir las características morfotintoriales de los microorganismos.
Por lo general se usa en preparaciones fijas, pues no es recomendable en preparaciones al fresco. Esto se debe a que la tensión superficial del aceite hace que el cubreobjeto se mueva, lo que origina que la muestra se desplace durante su observación e impida su análisis.
Por otra parte, el aceite de inmersión no solo es útil en la microscopía óptica convencional: también se usa en microscopios de fluorescencia de reflexión interna total (TIRFM) y en las aplicaciones de fluorescencia confocal.
Para ver una preparación al microscopio primero se debe enfocar la preparación con el objetivo de menor aumento, por lo general el de 10X, con poca intensidad de luz.
Luego se pasa al objetivo de 40X, y se aumenta ligeramente el paso de luz. Algunos análisis pueden realizarse con este aumento, pero para ver detalles estructurales se necesita el aumento de 100X.
Antes de pasar al objetivo de 100X se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjeto, justo donde se quiere observar, y posteriormente se mueve el revólver del microscopio para ubicar el objetivo de 100x en la preparación.
Se regula (aumenta) la intensidad de la luz (moviendo el condensador y abriendo el diafragma). Luego, con unos pequeños movimientos que se le dé al tornillo micrómetro (hacia adelante o hacia atrás) se debería enfocar perfectamente si el microscopio usa objetivos parafocales.
Si se intenta enfocar la preparación directamente con el objetivo de inmersión, es posible que haya problemas para encontrar el enfoque. No es una acción imposible, pero la dificultad aumenta significativamente.
Para usar el aceite de inmersión hay que tener en cuenta ciertas condiciones.
Cuando se ha realizado una preparación coloreada, como por ejemplo un frotis teñido con Giemsa o un Gram, hay que esperar que el frotis seque completamente antes de colocar el aceite de inmersión. De lo contrario, el aceite junto con el agua formará micelas que no dejarán visualizar la preparación.
Por otra parte, después de observar el lote de preparaciones, es decir, al terminar la jornada de trabajo, se debe limpiar cuidadosamente el objetivo de 100X, usando un papel para lentes con etanol. Si se deja el lente sucio, el aceite se secará sobre él y luego será muy difícil retirarlo, dañando el campo de visualización.
Así mismo, hay que tener en cuenta que el aceite es inflamable y debe tenerse alejado de fuentes de calor (mecheros). Es importante evitar calentarlo por encima de 65°C.
Finalmente, el aceite es un producto tóxico. Por tanto debe evitarse el contacto directo con piel y mucosas, donde puede producir irritación leve. Para evitar accidentes, se recomienda el uso de guantes y lentes de seguridad para manipularlo.
En caso de que se tenga contacto con el aceite, debe lavarse el área con abundante agua. Si el aceite salpica en los ojos, se debe lavar de la misma manera, manteniendo los ojos abiertos. En caso de ingestión accidental, es importante ingerir agua tibia e inducir el vómito, además de acudir al médico más cercano.
- “Microscopio de fluorescencia de reflexión interna total.” Wikipedia, La enciclopedia libre. 30 dic 2018, 22:46 UTC. 14 may 2019, 01:54
- IVD. Microscopía Aceite de inmersión. Disponible en: Users/Equipo/Downloads.
- Biología y Microbiología Ambiental. Manejo del microscopio óptico. Disponible en: eumed.net/libros.
- Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Historia del microscopio y su repercusión en la Microbiología. Rev Hum Med, 2015; 15( 2 ): 355-372. Disponible en: scielo.
- Herrero J. Practica Nº 1: Fundamentos y manejo del microscopio óptico compuesto común. Universitat d´Alacant Disponible en:rua.ua.es/dspace
- Scharlau – MSDS. Aceite de inmersión, para microscopía. 2001. Disponible en: insumos-labcentral.