Agar sal y manitol: fundamento, preparación y usos
El agar sal y manitol o manitol salado es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial. Fue creado por Chapman para el aislamiento de cocos Gram positivos patógenos, especialmente Staphylococcus aureus.
Sin embargo, también es útil para aislar Staphylococus epidermidis, que en ocasiones puede estar presente como patógeno oportunista, y Staphylococcus saprophyticus, reconocido patógeno urinario, entre otras especies.
Algunos Enterococcus son capaces de crecer en este medio, así como también ciertos bacilos Gram positivos formadores de esporas.
Este medio es de gran utilidad en el análisis de muestras clínicas, pero también se usa en el estudio microbiológico de alimentos y en el control de calidad de productos industriales, como cosméticos, medicinas, entre otros.
El agar manitol salado está compuesto por extractos y peptonas de carne bovina, tripteína, manitol, cloruro de sodio, rojo de fenol y agar.
Índice del artículo
El agar manitol es selectivo gracias a la alta concentración de sal que posee. La salinidad actúa como sustancia inhibitoria y evita el crecimiento de bacterias Gram negativas.
También es diferencial debido a la presencia del carbohidrato manitol y al indicador de pH rojo de fenol. A partir de este, las bacterias capaces de fermentar el manitol producen ácidos, acidificando el medio, tornándose las colonias y el medio de color amarillo.
Por otra parte, las colonias que no fermentan el manitol crecen en el medio tomando los nutrientes que les proporciona los extractos y peptonas de carne y la tripteína. De allí las bacterias extraen el carbono, el nitrógeno, las vitaminas y los minerales necesarios para su crecimiento.
Las colonias en este caso pueden ser rosadas débil o fuertes, y el medio se queda del mismo color o cambia a fucsia.
El agar es la sustancia que proporciona la consistencia al medio.
Para preparar un litro de agar manitol salado se pesan 111 gr del medio deshidratado de la casa comercial de preferencia y se disuelven en 1000 ml de agua destilada, utilizando una fiola.
Se aplica calor removiendo frecuentemente el medio para mejorar el proceso de disolución. Se deja hervir durante un minuto.
Se coloca la fiola en el autoclave a 121°C por 15 minutos.
Terminado el tiempo, se saca la fiola del autoclave, se deja reposar y se sirve entre 15 a 20 ml sobre placas de Petri estériles cuando la temperatura sea aproximadamente de 50 a 55°C.
Se deja solidificar, ordenando de forma invertida en plaqueros y guardando en nevera hasta su uso. Antes de sembrar una muestra, se debe esperar a que la placa tome la temperatura del ambiente.
Se siembran las placas por estriamiento o por sembrado en superficie con espátula de drigalski. El pH final del medio preparado debe quedar en 7,4 ± 0,2
El color del medio deshidratado es beige claro y el color del medio preparado es rojo naranja.
Por su alta selectividad, este medio es ideal para sembrar muestras con flora mixta en la que se quiere buscar la presencia de Staphylococus aureus, como principal patógeno de este género.
En este sentido, uno de sus usos más frecuentes es en el análisis microbiológico de muestras de exudados faríngeos y secreción nasal, especialmente para detectar portadores asintomáticos de S. aureus.
Algunos países han implementado este análisis como requisito obligatorio para personas que desean trabajar como expendedores de alimentos.
Este control previene que se contraten personas portadoras de S. aureus, evitándose así que haya intoxicaciones alimentarias masivas, debido al consumo de alimentos contaminados con la enterotoxina estafilocócica.
También puede incluirse en la siembra de infecciones de heridas, hemocultivos, LCR, lavado bronco alveolar, entre otras.
El agar manitol salado es útil para reaislar colonias de urocultivos provenientes de agar CLED o agar sangre cuyo Gram haya revelado cocos Gram positivos en racimos.
También es válido en el análisis microbiológico de alimentos, agua potable, suelos, entre otras aplicaciones.
Una vez preparado un lote de placas con agar manitol salado es aconsejable realizar un control de calidad. Se siembran cepas controles para evidenciar si hay o no crecimiento de los mismos.
Como control positivo se pueden usar cepas conocidas de Staphylococcus aureus. El mismo debe crecer satisfactoriamente desarrollando colonias amarillas, y el medio también se torna del mismo color.
Así mismo, es conveniente incluir una cepa conocida de Staphylococcus epidermidis. Debe crecer satisfactoriamente desarrollando colonias de color rosadas, y el medio se queda del mismo color o se oscurece en un rosado más fuerte.
Como control negativo, se utilizan cepas que no deberían crecer en este medio. Por ejemplo, se puede sembrar una cepa conocida de Escherichia coli o Klebsiella pneumoniae. El resultado esperado es inhibición completa, es decir, no crecimiento.
Adicionalmente se debe incubar una placa sin inocular. En el mismo no debe haber crecimiento, ni cambio de color.
Es importante que no se use la placa si se tienen indicios de deterioro, como contaminación, deshidratación, decoloración, entre otros.
Al usar el medio agar manitol salado hay que tener en consideración algunos aspectos importantes:
-Obtener un crecimiento de colonias amarillas no indica que sea Staphylococcus aureus. Hay que recordar que algunas cepas de Enterococcus son capaces de crecer en este medio y fermentar el manitol, así como ciertos bacilos Gram positivos formadores de esporas.
Por tanto, es importante realizar un Gram a la colonia y una prueba de catalasa.
-Por otra parte, hay que considerar que otras especies de Staphylococcus diferentes al aureus también son capaces de fermentar el manitol. Por tanto, es importante sub-cultivar la colonia a un caldo nutriente para tomar de allí y realizar la prueba de la coagulasa.
Entre las especies de Staphylococcus de importancia clínica para el hombre que fermentan el manitol están: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, entre otros.
Otras pueden dar reacción variable, es decir, algunas veces positivas y otras negativas. Algunas son S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre otras.
-No se recomienda tomar colonias de forma directa del agar manitol para realizar la prueba de la coagulasa, ya que la alta concentración de sal del medio puede interferir en el resultado.
-Finalmente se recomienda incubar las placas sembradas de manitol salado hasta durante 48 horas, debido a que algunas cepas de S. aureus pueden fermentar lentamente el manitol, aunque esto no es muy frecuente.
- Laboratorios Britania. Manitol salado agar. 2015. Disponible en: britanialab.com
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