Medio Stuart: fundamento, preparación y usos
El medio Stuart es un agar semisólido o un caldo sin nutrientes, utilizado para el transporte de muestras biológicas. Su finalidad es mantener viables por un tiempo determinado las cepas presentes en la muestra, pero sin que aumente la población microbiana.
Fue creado por Moffet, Young y Stuart en 1948 y posteriormente modificado por Toshach y Patsula. Está compuesto por glicerofosfato sódico, tioglicolato sódico, cloruro cálcico y agar-agar. Este último está presente en el medio semisólido y ausente en el líquido. Algunos laboratorios le adicionan azul de metileno.
Por lo general se usan cuando no es posible sembrar la muestra de forma inmediata. En este caso la muestra se coloca en el medio de transporte, mientras es trasladada al laboratorio que procesará el cultivo.
De esta manera se garantiza que los microorganismos presentes se mantengan vivos hasta que sean inoculados en los medios de cultivos correspondientes.
En un inicio su uso estaba destinado para transportar muestras uretrales o vaginales en donde se sospechaba la presencia de Neisseria gonorrhoeae. Posteriormente, se dieron cuenta que su utilidad podía ser más amplia.
El medio Stuart resultó ser muy eficiente en la preservación de microorganismos lábiles y fastidiosos como Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis, entre otros. Además de otros microorganismos no fastidiosos como las Enterobacterias.
El medio Stuart básicamente evita la desecación de la muestra, mantiene el balance osmótico y conserva los microorganismos a un pH idóneo. Por otra parte, estratégicamente este medio no contiene nutrientes, con ello se evita que los microorganismos se multipliquen.
En el mercado existen dispositivos especiales de transporte de muestras que contienen este u otros medios de transporte, llamados culturette. También pueden ser preparados en el laboratorio.
Índice del artículo
- 1 Fundamento
- 2 Características del medio de transporte
- 3 Preparación
- 4 Usos
- 5 Identificación de la muestra en medios de transporte
- 6 Control de calidad
- 7 Limitaciones
- 8 Referencias
El fin del medio de transporte Stuart es mantener las muestras lo más cercano a su estado original, hasta que sea procesada.
El glicerofosfato sódico y el cloruro cálcico es un sistema buffer que actúa manteniendo el pH y la osmolaridad.
En tanto que, el tioglicolato sódico actúa como un agente reductor y en el caso de contener agar este le da la consistencia semisólida, para retrasar la oxigenación del medio. Finalmente el azul de metileno es un indicador de oxidación, es decir, detecta la presencia de oxígeno.
El medio semi-sólido con indicador redox es ideal para el transporte de muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias anaerobias.
El medio Stuart, como todo medio de transporte, cumple con ciertas características, entre ellas:
-Mantiene viables las cepas microbianas presentes sin que se multipliquen.
-No contiene nutrientes; sus compuestos están dirigidos a mantener hidratada la muestra, en condiciones adecuadas de pH y osmolaridad.
-Inhibe el autolizado de algunos microorganismos delicados, tal como el Pneumococo.
-Su uso es temporal, no debe prolongarse demasiado.
Preparación casera
Ingredientes
Glicerofosfato sódico 10 gr
Tioglicolato sódico 1.0 gr
Cloruro cálcico 0.1 gr
Azul de metileno 0.002 gr
Agar-agar 3 gr
Agua destilada 1 L
Mezclar los componentes y calentar hasta disolución total. Verter en tubos o en escobillones especiales. Se introducen en el autoclave y se esteriliza a 121 ºC por 15 minutos. Dejar enfriar los tubos en posición vertical (en forma de taco). Mantener a temperatura ambiente.
Preparación con medio comercial
Pesar 14,1 gr del medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando frecuentemente hasta su disolución total, se puede dejar hervir. El resto del procedimiento como ya fue descrito.
El medio deshidratado es color crema y preparado debe quedar azul en su superficie. Esto se debe a la presencia del azul de metileno.
El pH del medio se debe ajustar a 7,4 ± 0,2
Ingredientes
Glicerofosfato de sodio 10 gr
Tioglicolato de sodio 1 gr
Cloruro de calcio dihidratado 0,1 gr
Agua destilada 1000 ml
Lleva los mismos ingredientes que el semi-sólido, pero no lleva agar, ni azul de metileno. En este caso se mezclan los componentes sin calentar y se distribuye 0,5 ml en tubos de 16 x 125 mm con tapa de rosca.
Se esteriliza en autoclave a 121 °C por 10 minutos. Para la toma de muestra se deben usar hisopos de dacrón si la muestra es para PCR o rayón si es para cultivo.
Los tubos se guardan a temperatura ambiente.
Comercialmente existen unos dispositivos especiales de transporte de muestras llamados culturette; este dispositivo es un tubo alargado y delgado que trae un hisopo en su interior y al final hay un segmento que contiene el medio Stuart semisólido o líquido.
El dispositivo se abre y con el hisopo se toma la muestra. Luego se introduce nuevamente en el tubo hasta que la punta del hisopo quede insertada dentro del medio de transporte semi-sólido; algunos traen una esponja de poliuretano impregnada del medio Stuart líquido, con el cual se preserva la muestra al mantenerse húmeda.
En el caso que se sospeche la presencia de microorganismos delicados debe emplearse escobillones de algodón con carbón en la toma de muestra.
Las muestras que pueden ser tomadas con hisopos o escobillones y trasladadas en este medio son exudados faríngeos, hisopados rectales y diversas secreciones, entre ellas: vaginales, uretrales, de heridas, oculares, óticas y de abscesos.
Durante el traslado de la muestra en el medio de transporte hacia el laboratorio debe evitarse el sometimiento del medio a condiciones ambientales extremas (mucho frío o mucho calor). También debe evitarse cambios bruscos de presión atmosférica.
El tiempo en el que el medio es capaz de mantener viable a un microorganismo dependerá de la cepa en cuestión. Por ejemplo, para microorganismos del género Neisserias y Haemophilus pueden mantenerse viables hasta por 24 horas, pero cepas como Salmonella o Shigella pueden durar días y hasta semanas.
Si se estima que el procesamiento de la muestra puede tardar más de 4 días es preferible congelar la muestra a -70°C.
El medio de trasporte preparado o el culturette comercial deben tener una etiqueta donde se colocarán los siguientes datos:
Nombre y apellido del paciente: evita la confusión de muestras.
Nro de identificación: es conveniente para llevar un orden en el trabajo.
Fuente de la toma de muestra: ayuda al bacteriólogo a la escogencia de los medios de cultivo apropiados.
Médico tratante: En ocasiones es necesario para posibles consultas.
Fecha y hora de la toma de muestra: es necesario para la aceptación o rechazo de muestra de acuerdo al tiempo transcurrido entre la toma de muestra y el recibimiento en el laboratorio.
Otra información que sería muy útil anexar es:
El diagnóstico presuntivo: orienta en la adición de medios de cultivos especiales de acuerdo a la sospecha diagnóstica.
Tratamiento con antibióticos: es útil para ser anexado en el antibiograma.
Toda esta información es vital para garantizar el buen procesamiento de la muestra.
Para evaluar el funcionamiento del medio Stuart se pueden inocular cepas conocidas y mantenidas a 25°C, tales como: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.
En todos los casos se espera recuperar al microorganismo en cuestión, preservada por 24 horas.
Por otra parte, se pueden usar otras cepas tales como: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Escherichia coli ATCC 11775.
En todos los casos se espera una abundante recuperación hasta por 96 horas.
Algunos estudios aseguran que el glicerofosfato presente en el medio Stuart puede ser metabolizado por algunos coliformes, entre otras bacterias Gram negativas y por ende multiplicarse en este medio.
Este riesgo se incrementa mientras más se retarde el procesamiento de la muestra. Así mismo, la exposición del medio Stuart a temperaturas elevadas durante su traslado influye en este particular.
- “Medio de transporte (microbiología).” Wikipedia, La enciclopedia libre. 13 abr 2018, 10:36 UTC. 1 abr 2019. Disponible en: es.wikipedia.org
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