Agua peptonada: fundamento, preparación y usos
El agua peptonada es un medio de enriquecimiento líquido, no selectivo, utilizado principalmente como diluyente de muestras de alimentos u otros materiales. Este medio desde el punto de vista químico es muy simple, contiene peptona de carne, cloruro de sodio y agua.
Tiene cierto valor nutritivo, permitiendo enriquecer la muestra. Si existen bacterias maltratadas este medio tiene el poder de reparar la viabilidad. Es especialmente útil en la recuperación de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae.
En el caso de la recuperación de Salmonellas se recomienda el uso de la variante de agua peptonada bufferada; esta sirve como medio de pre-enriquecimiento de la muestra, en este caso contiene otros elementos como fosfato disódico y fosfato dipotásico.
Normalmente el agua peptonada se prepara a pH neutro, sin embargo existen otras variantes donde es necesario que el pH sea de 8,5 ± 0,2 (alcalino), debido a que la bacteria que se pretende aislar es alcalófila, como por ejemplo el Vibrio cholerae.
Por otra parte, este medio puede utilizarse como medio base para pruebas de fermentación de carbohidratos.
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Las peptonas proporcionan los nutrientes requeridos para el desarrollo bacteriano, especialmente nitrógeno y aminoácidos de cadena corta, mientras que el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico.
Además, el medio permite dispersar, homogeneizar y reparar las células bacterianas que han sido dañadas por sometimiento a procesos industriales.
Como diluyente es ideal, sustituyendo eficazmente a la solución fisiológica (SSF) o a la solución amortiguadora de fosfatos (PBS).
El crecimiento bacteriano se hace evidente por la observación de la turbidez del mismo.
Pesar 1 gr de peptona y 8,5 gr de cloruro de sodio, disolver en 1 litro de agua destilada. El pH debe quedar ajustado a 7,0. Para ello se puede usar cloruro de sodio 1 N.
Pesar 15 gr del medio deshidratado y disolver en un litro de agua destilada. Homogeneizar la mezcla. Si es necesario se hierve la mezcla por 1 minuto para ayudar a la disolución total. Servir en frascos de 100 ml o en tubos de 10 ml según sea necesario. Autoclavar a 121°C por 15 minutos.
Enfriar y usar o guardar en nevera. El pH final del medio es de 7,2 ± 0,2.
El color del medio deshidratado es beige claro y preparado es ámbar claro.
A la preparación anterior -antes de esterilizar- se le debe añadir el carbohidrato a una concentración final de 1%, más el indicador de Andrade (fucsina ácida) o rojo de fenol (0.018 g/L). A los tubos se les debe colocar una campanita de Durham para la observación de formación de gas.
-Agua peptonada tamponada o bufferada
Esta contiene hidrolizado enzimático de caseína, cloruro de sodio, fosfato dihidrogenado de potasio e hidrógeno fosfato de sodio dodecahidrato. El pH final es de 7,0 ± 0,2.
Para su preparación, pesar 20 gr del medio deshidratado y disolver en 1 litro de agua destilada. Dejar en reposo por 5 minutos aproximadamente. Calentar por 1 minuto hasta disolver completamente.
Verter sobre frascos adecuados según la necesidad. Esterilizar utilizando el autoclave a 121°C por 15 minutos.
-Agua peptonada alcalina
Pesar 25 gr del medio deshidratado y disolver en 1 litro de agua. Proceder como se ha descrito anteriormente. El pH oscila entre 8,3 a 8,7.
El inóculo se realiza colocando la muestra de forma directa.
Se usa para diluir las muestras, especialmente cuando se sospecha que puedan haber bacterias dañadas. Por lo general las diluciones son 1:10 y 1:100.
Se incuba por 24 horas en aerobiosis a 35-37 °C.
Para muestras de heces en busca de Salmonella se recomienda el uso de agua tamponada o bufferada como medio de pre-enriquecimiento.
Para ello, proceder de la siguiente manera:
Si las heces están formadas tomar 1 gr de muestra. Si son líquidas tomar 1 ml de heces y suspender en un tubo con 10 ml de agua peptonada bufferada. En el caso de hisopados rectales, descargar el material contenido en el hisopo en el tubo con agua peptonada tamponada.
En todos los casos, mezclar y homogeneizar muy bien la muestra.
Incubar a 37°C por 18 a 24 horas. Posteriormente sub-cultivar en un caldo de enriquecimiento como caldo selenito cistina o caldo tetrationato a 37°C por 18-24 horas más. Finalmente cultivar en medios selectivos para Salmonella, tales como agar SS, agar XLD, agar Hektoen, entre otros.
El agua peptonada se utiliza como medio de enriquecimiento o como simple diluyente, pero si se buscan especies de Salmonella se utiliza como medio de pre-enriquecimiento, tal como ya fue descrito.
En alimentos proceda de la siguiente manera:
Para alimentos sólidos pesar 25 gr de la muestra y para alimentos líquidos medir 25 ml del mismo. Colocar dicha porción en frascos que contengan 225 ml de agua peptonada. Mezclar y homogeneizar la muestra.
Si se sospecha que la carga microbiana es alta se pueden realizar diluciones seriadas o decimales para facilitar el contaje de las unidades formadoras de colonias (UFC).
El número de diluciones dependerá del tipo de muestra y de la experiencia del analítico.
Si por el contrario se sospecha que la carga microbiana es muy baja, no es necesario realizar diluciones. Posteriormente, subcultivar en medios selectivos.
En el caso de alimentos provenientes del mar, como mariscos, pescados, entre otros, en busca de Vibrio cholerae u otras especies de Vibrio, se debe usar agua peptonada ajustada a pH 8,5 (agua peptonada alcalina).
De cada lote preparado se debe incubar uno a dos tubos sin inocular por 24 horas en aerobiosis a 37 °C. Terminado el tiempo no debe observarse turbidez, ni cambio de color.
También se pueden usar cepas controles conocidas para evaluar su efectividad:
Para ello se pueden usar las siguientes cepas bacterianas: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
En todos los casos se espera un desarrollo microbiano satisfactorio, el cual se observa por turbidez del medio.
-El medio deshidratado es muy higroscópico, por lo que debe mantenerse alejado de la humedad.
-El medio no debe ser utilizado si se observa algún tipo de deterioro.
-El medio de cultivo deshidratado debe conservarse entre 10 – 35 °C
-El medio preparado debe mantenerse refrigerado (2-8°C).
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B y Velázquez O. Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2009, 2ª ed. Facultad de Química, UNAM. México. Versión para Administrador de Manuales y Documentos (AMyD) de la Facultad de Química, UNAM 1. Disponible en: http://depa.fquim.unam.mx
- Laboratorios Britania. Agua peptonada bufferada. 2015. Disponible en: britanialab.com
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- Laboratorios Merck. Agua peptonada tamponada. Disponible en: merckmillipore.com
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