Agar soya tripticaseína: fundamento, preparación y usos
El agar soya tripticaseína o agar soya tripticasa es un medio de cultivo sólido, no selectivo y nutritivo. Se designa con las letras TSA por sus siglas en ingles Trypticase Soy Agar. Está compuesto por tripteína, peptona de soya, cloruro de sodio y agar-agar.
Por su alto poder nutritivo es ideal para el cultivo de microorganismos moderadamente exigentes y no exigentes. El medio sin suplementos adicionales no es recomendable para cultivos primarios, pero es muy útil para subcultivar cepas puras y mantenerlas viables, entre otros usos.
También, este agar sirve como base para la preparación de medios enriquecidos como el agar sangre, especialmente cuando se requiere observar los patrones de hemólisis y para montar los taxos de optoquina y bacitracina, requeridos en el diagnóstico de Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes respectivamente.
Por otra parte, cuando se combina con antibióticos es útil para aislar microorganismos anaerobios facultativos y estrictos de importancia clínica provenientes de muestras con flora mixta.
Finalmente, la composición del agar soya tripticaseína y su rendimiento cumple con las exigencias establecidas por las distintas farmacopeas (europea, japonesa y norteamericana).
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Para el buen desarrollo de las bacterias es necesario la presencia de aportes energéticos, tales como aminoácidos, vitaminas, bases púricas y pirimídicas.
En este sentido, la tripteína y la peptona de soya brindan estos nutrientes a los microorganismos, permitiendo así su desarrollo pleno. Sin embargo, para las bacterias exigentes es necesario suplementar este agar con sangre desfibrinada o sangre calentada para aumentar su enriquecimiento.
Por otra parte, si al medio se le agregan antibióticos, el mismo se convierte en un medio selectivo. También se le puede adicionar 0.6 % de extracto de levadura para favorecer el aislamiento de especies del género Listeria, mientras que el agregado de cistina telurito y sangre de cordero es ideal para Corynebacterium diphteriae.
Finalmente, el cloruro de sodio le brinda el balance osmótico al medio y el agar le proporciona la consistencia sólida.
Para preparar el agar soya tripticaseína se deben pesar 40 gr del medio comercial deshidratado en una balanza digital. Se disuelve en un litro de agua destilada contenida en una fiola.
La mezcla se deja en reposo por 5 minutos y posteriormente se lleva a una fuente de calor para ayudar a la disolución del medio. Se debe agitar frecuentemente y dejar hervir por 1 o 2 minutos. Posteriormente, se esteriliza el medio en el autoclave a 121°C por 15 minutos.
Dejar enfriar hasta 50°C y distribuir en placas de Petri estériles. Dejar solidificar, invertir, ordenar en plaqueros y guardar en nevera.
El pH final del medio debe quedar en 7,3 ± 0,2.
Se debe tener en cuenta que el color del medio de cultivo deshidratado es beige claro y debe almacenarse entre 10 a 35°C, en lugar seco.
Por su parte, el agar preparado es de color ámbar claro. Las placas preparadas deben guardarse en nevera (2 a 8°C) hasta su uso.
Las placas deben alcanzar la temperatura ambiente antes de ser utilizadas.
El agar sangre se prepara adicionando 5% de sangre desfibrinada al momento de enfriar el agar soya tripticaseína a 50°C. La mezcla se homogeiniza rotando con movimientos suaves.
Servir en las placas de Petri estériles. El color del medio debe quedar rojo cereza.
Para preparar el agar sangre con base de TSA se procede igual a los procedimientos ya descritos, pero al salir del autoclave se deja reposar hasta que la temperatura del medio esté aproximadamente entre 56 a 70°C. En ese momento se coloca la sangre y se mezcla hasta que el medio se torne color marrón.
Servir en placas de Petri estériles. El color del medio es marrón achocolatado.
El procedimiento de preparación del agar es igual al descrito para placas, con la diferencia de que en vez de servir el medio sobre placas de Petri, se distribuye entre 10 a 12 ml en tubos con tapa de baquelita antes de esterilizar.
Posteriormente, se autoclavan los tubos a 121°C por 15 minutos. Al salir se inclinan con ayuda de un soporte y se dejan solidificar.
Las cuñas preparadas se siembran por superficie y sirven para mantener ciertos microorganismos no exigentes viables, por un tiempo determinado.
El agar soya tripticaseína se usa en los siguientes casos:
-Como base para preparar el agar sangre clásico que se usa de rutina en la mayoría de los laboratorios.
-El aislamiento de bacterias exigentes.
-Observación del patrón de hemólisis.
-Ejecución de pruebas diagnósticas.
-Como base para preparar agar sangre especial para Corynebacterium diphteriae, con cistina telurito y sangre de cordero.
-Como base para preparar agar sangre de cordero, más kanamicina-vancomicina para el crecimiento de anaerobios, especialmente Bacteroides sp.
–Para mantenimiento de cepas no exigentes (Bacterioteca).
–Recuento microbiano aerobio en el estudio de límite microbiano de muestras de agua, ambiente, alimentos y cosméticos.
Las muestras se pueden sembrar de forma directa sobre la superficie del agar soya tripticaseína suplementado con sangre u otros aditivos. Se siembra por agotamiento.
En tanto que, las placas de agar soya tripticaseína sin aditivos se usan generalmente para subcultivar cepas microbianas (bacterias o levaduras).
Para comprobar la esterilidad de los distintos medios preparados con el agar base soya tripticaseína se recomienda hacer lo siguiente: de cada lote preparado se debe incubar 1 o 2 placas o tubos sin inocular a 37 °C por 24 horas para demostrar su esterilidad. En todos los casos debe permanecer sin crecimiento.
Si se comprueba contaminación, el lote completo debe ser descartado.
Para estudiar el buen funcionamiento del agar soya tripticaseína se pueden usar las siguientes cepas bacterianas: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 y Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Se siembran las cepas y se incuban en aerobiosis a 37°C por 24 horas.
En todos los casos el crecimiento debe ser satisfactorio.
También se pueden usar hongos como el Complejo Candida albicans ATCC 10231 y Aspergillus niger ATCC 16404. Se espera un buen crecimiento para ambas cepas.
Para verificar el buen funcionamiento del agar sangre preparado con esta base se pueden usar las siguientes cepas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 y Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Se siembran y se incuban a 37°C en microaerofilia por 24 horas.
En todos los casos el crecimiento debe ser satisfactorio, tomando en cuenta que en S. pyogenes debe observarse beta-hemólisis (halo claro alrededor de la colonia) y en ambas cepas de S. pneumoniae se debe observar hemólisis alfa (halo verdoso alrededor de las colonias).
- Wikipedia contributors. Trypticase soy agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. December 17, 2018, 15:47 UTC. Available at: https://en.wikipedia.org
- Laboratorios Britania. Tripteína soya agar. 2015. Disponible en: britanialab.com
- Laboratorios Neogen. Agar de soya tríptico. Disponible en: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A.
- Laboratorios BD. Trypticase Soy Agar. 2014. Disponible en: .bd.com