Agar BHI: fundamento, preparación y usos
El agar BHI o agar Brain Heart Infusión es un medio de cultivo sólido nutritivo. En español nos referimos a él como agar infusión cerebro corazón. Es un medio de cultivo no selectivo, lo que quiere decir que pueden desarrollarse todo tipo de bacterias Gram positivas y Gram negativas, así como algunos hongos levaduriformes y filamentosos.
Está compuesto por infusión de cerebro y corazón de ternera, hidrolizado péptico de tejidos animales, hidrolizado pancreático de caseína, cloruro sódico, glucosa, fosfato disódico y agar.
Cabe destacar que el agar BHI es uno de los medios de cultivo de uso más frecuentes en los laboratorios de bacteriología. Puede utilizarse sin suplementos como cultivo primario, subcultivo de colonias obtenidas en otros medios selectivos o para el mantenimiento de cepas en el laboratorio.
Por otra parte, es un medio ideal para ser utilizado como base en la preparación de medios enriquecidos, como el agar sangre y el agar chocolate. Ambos ideales para aislar microorganismos exigentes desde el punto de vista nutricional. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que como contiene glucosa no es adecuado para observar los patrones de hemólisis.
Así mismo, el agar BHI puede ser utilizado para la preparación de medios especiales para el aislamiento de microorganismos patógenos de difícil crecimiento en los medios comunes, entre ellos: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae e Histoplasma capsulatum.
Con el aditivo de antibióticos el agar BHI se convierte en un medio selectivo para el aislamiento de hongos.
Índice del artículo
Es un medio de cultivo nutritivo para aislar microorganismos moderadamente exigentes, pudiéndose aumentar su enriquecimiento con la adición de sangre y otros suplementos nutritivos.
Es un medio de cultivo no selectivo, por tanto permite el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram positivas y Gram negativas, así como también de algunos hongos. Sin embargo, se puede convertir en selectivo con la adición de antibióticos.
El medio contiene infusión de cerebro y corazón de ternera, hidrolizado péptico de tejidos animales e hidrolizado pancreático de caseína; todos estos compuestos actúan como fuentes de vitaminas, aminoácidos, nitrógeno y carbono.
La glucosa es un carbohidrato que proporciona energía a los microorganismos una vez que estos lo han fermentado. En tanto que, el cloruro sódico y el fosfato disódico mantienen el equilibrio osmótico y proporcionan un pH cercano a la neutralidad. Finalmente, el agar da la consistencia sólida al medio.
Pesar 52 gramos del medio deshidratado y disolver en un litro de agua destilada. Llevar la mezcla a una fuente de calor hasta hervir, agitando frecuentemente durante el proceso de disolución.
Se pueden preparar cuñas o placas de agar BHI sin aditivos.
Para la preparación de cuñas servir la preparación hasta rellenar la mitad de cada tubo, tapar y esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos, al salir acostar sobre una base hasta que solidifiquen. Posteriormente guardar en nevera hasta su uso.
La mezcla disuelta se autoclava a 121°C por 15 minutos, al salir se deja enfriar hasta 50°C y se sirven 20 ml del medio en placas de Petri estériles. Se dejan solidificar, se invierten y se guardan en nevera hasta su uso. Dejar que las placas tomen temperatura ambiente antes de sembrar.
El pH del medio debe quedar en 7,4 ± 0,2.
El medio sin preparar es de color beige y preparado es de color ámbar claro.
Después de esterilizar el medio, enfriar hasta una temperatura aproximada de 45 a 50 °C, en ese momento agregar la sangre (50 ml), mezclar suavemente para homogenizar y servir asépticamente 20 ml en cada placa de Petri. Si se forman burbujas sobre la placa se debe pasar rápidamente la llama del mechero sobre las burbujas para eliminarlas.
Así mismo, se pueden preparar los medios especiales agregando los aditivos correspondientes cuando la mezcla alcance la temperatura de 45 a 50°C.
El medio queda de color rojo cereza.
El agar BHI sin aditivos es útil como cultivo primario y para sembrar cepas puras de microorganismos poco o medianamente exigentes para su posterior identificación.
Como es un medio de color claro, es ideal para la observación de pigmentos y además al no contener sustancias interferentes se pueden realizar sobre él algunas pruebas bioquímicas, como la oxidasa y la catalasa, o montar otras pruebas bioquímicas a partir de colonias provenientes de este agar.
Así mismo, las cuñas de agar BHI son muy utilizadas para el mantenimiento de cepas por un tiempo determinado en el laboratorio (bacterioteca).
Las placas o cuñas sembradas por superficie con cepas bacterianas se incuban a 37°C por 24 a 48 horas. En tanto que, en hongos la temperatura y el tiempo de incubación dependerá del tipo de hongo que se busca.
Con esta base se pueden preparar medios enriquecidos y selectivos.
Enriquecidos
Su principal función es servir como base en la preparación del agar sangre de uso de rutina en los laboratorios de microbiología. Especialmente, la base de BHI es propicia para el aislamiento de cepas de Streptococcus sp. Sin embargo, tiene el inconveniente de no ser adecuado para la observación de los patrones de hemólisis por contener glucosa.
También se usa en la preparación del agar sangre de conejo o de caballo para el aislamiento de Haemophilus sp. Para mejores resultados se puede adicionar un suplemento de enriquecimiento (IsoVitaleX).
Si las muestras provienen del tracto respiratorio al agar se le puede adicionar bacitracina para inhibir la flora acompañante y aumentar la probabilidad de recuperación de las cepas de Haemophilus sp.
Por otra parte, se puede preparar agar sangre (cordero o humana) con cistina telurito para aislar Corynebacterium diphtheriae. Así mismo, es útil para preparar agar sangre de conejo, con el agregado de cistina y glucosa para el aislamiento de Francisella tularensis.
El sembrado de las placas de agar sangre se realiza por agotamiento y se incuban a 35-37°C por 24-48 horas en microaerofilia (5-10% de CO2).
Selectivo
Este medio con el agregado de antibióticos puede sustituir al agar Sabouraud para el aislamiento de hongos.
El combinado de agar BHI con cloranfenicol – gentamicina o penicilina -, estreptomicina y sangre de caballo es ideal para el aislamiento de Histoplasma capsulatum.
Dependiendo del microorganismo que se busca aislar se recomienda la incubación a 35-37°C o a temperatura ambiente en aerobiosis. En ocasiones es necesario la incubación en ambos rangos de temperatura, utilizando 2 placas para ello.
Algunos hongos como Trichophyton mentagrophytes se deben incubar a temperatura ambiente hasta por 7 días.
De cada lote preparado se recomienda incubar 1 placa o cuña a 37°C por 24 horas y verificar que no haya crecimiento; especialmente es importante cuando se prepara agar sangre, debido a que es un medio fácilmente contaminable.
Por otra parte, se puede evaluar la calidad del medio inoculando cepas patrones conocidas o certificadas y observar su desarrollo.
En este sentido, para evaluar el agar BHI sin aditivos se pueden usar cepas de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Candida albicans ATCC 10231. Se incuban a 37°C en aerobiosis por 24 a 48 horas. En todos los casos se espera un crecimiento satisfactorio.
Para evaluar las placas de agar sangre se pueden sembrar cepas de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 o Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.
Las cepas bacterianas se incuban a 37°C en microaerofilia por 24 horas, mientras que el hongo se incuba a temperatura ambiente en cámara húmeda hasta por 7 días. En todos los casos se espera crecimiento satisfactorio.
- Laboratorios Britania. Cerebro Corazón infusión Agar. 2015. Disponible en: britanialab.com.
- Laboratorios BD. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Disponible en: bd.com.
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
- Laboratorio Neogen. Brain Heart Infusion Agar. Disponible en: foodsafety.neogen.com
- Gil M. Agar sangre: fundamento, usos y preparación. 2018. Disponible en: lifeder.com.
- Wikipedia contributors. Brain heart infusion. Wikipedia, The Free Encyclopedia. September 19, 2018, 03:58 UTC. Available at: wikipedia.org. Accessed March 2, 2019.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.