Medio MIO: fundamento, preparación y usos
El medio MIO es una prueba bioquímica que se utiliza para ayudar en la identificación de especies de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Es bastante nutritivo y está compuesto por glucosa, extracto de levadura, peptona, tripteína, clorhidrato de L-ornitina, púrpura de bromocresol y agar.
El significado de sus siglas (MIO) describe cada uno de los parámetros que se pueden observar en este medio; motilidad, indol y ornitina. La motilidad es la capacidad del microorganismo de moverse por la presencia de flagelos. Para que esta propiedad pueda ser observada la consistencia del medio debe ser semisólida, por lo que la preparación lleva menos cantidad de agar.
La producción de indol evidencia la presencia de la enzima triptofanasa que actúa sobre el aminoácido triptófano, siendo necesario el uso de un reactivo revelador para hacer visible la producción de indol.
Finalmente, la ornitina determina si la bacteria es capaz de descarboxilar el aminoácido, es decir, si cuenta con la enzima orinitina descarboxilasa.
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Estos elementos contribuyen al poder nutritivo de este medio. Sirven como fuente de nutrientes y aminoácidos esenciales para el desarrollo bacteriano.
Además, la tripteína es una fuente de triptófano para evidenciar la presencia de la enzima triptofanasa, que degrada el triptófano por una desaminación reductiva liberando indol, ácido pirúvico, amoníaco y energía.
El indol es incoloro, por tanto su presencia se revela al agregar cinco gotas del reactivo de Ehrlich o de Kovacs, ambos con p-dimetilaminobenzaldehído.
El grupo aldehído de este compuesto reacciona con el indol, generando un producto de color rojo fucsia en forma de anillo en la superficie del agar.
Cualquier vestigio de color se debe considerar como una prueba positiva. La prueba debe leerse inmediatamente, pues pasado el tiempo el color se degrada.
Por otra parte, esta prueba debe revelarse después de haber anotado los resultados de la motilidad y la descarboxilación de la ornitina.
Interpretación
Prueba positiva: formación de un anillo de color rojo fucsia al agregar las gotas del reactivo de Kovacs.
Prueba negativa: no hay formación de anillo.
La capacidad de la bacteria de moverse se evidenciará si se observa un medio turbio o si hay una línea gruesa de crecimiento que se expande alrededor de la inoculación inicial.
Una prueba de motilidad negativa se evidenciará al observar una línea delgada de crecimiento, y todo alrededor estará sin crecimiento.
Es importante que la motilidad se lea antes de revelar el indol, ya que el agregado del reactivo enturbia todo el medio.
En bacterias móviles pero de lento crecimiento es difícil demostrar su motilidad con este medio. En este caso se recomienda usar otras pruebas o métodos, como el medio motilidad o del método gota pendiente.
La glucosa es el carbohidrato fermentable que además de aportar energía acidifica el medio, condición necesaria para que pueda ocurrir la descarboxilación del aminoácido ornitina.
La fermentación de la glucosa debe ocurrir siempre, partiendo del principio de que todas las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa.
En caso de que la bacteria produzca la enzima ornitina descarboxilasa, esta podrá actuar una vez que el medio haya sido acidificado por la fermentación de la glucosa.
La enzima ornitina descarboxilasa actúa sobre el grupo carboxilo del aminoácido produciendo una amina llamada putresina que alcaliniza nuevamente el medio.
Esta prueba debe leerse después de 24 horas de incubación, pues si se intenta leer antes se puede malinterpretar la prueba con un falso negativo.
Hay que recordar que la primera reacción que ocurre es la fermentación de la glucosa, por lo que el medio se torna de color amarillo en una fase inicial (primeras 10 a 12 horas). Si posteriormente ocurre la descarboxilación de la ornitina, el medio virará a morado.
Es importante interpretar la prueba de la descarboxilación de la ornitina antes de revelar el indol, ya que el agregado del reactivo de Kovacs modifica el color del medio.
Interpretación
Prueba negativa: medio de color amarillo o con fondo amarillo.
Prueba positiva: medio completamente morado.
En este caso se utiliza púrpura de bromocresol; el encargado de revelar cuando existe un cambio de pH en el medio. Al acidificarse, el indicador vira a amarillo, y al alcalinizarse vira a morado.
Para sembrar el medio MIO se utiliza un ansa recta o aguja y con ella se recoge una porción de la colonia a estudiar.
Se hace una punción profunda en el medio MIO en línea recta. No es recomendable realizar doble punción, ya que puede dar falsa imagen de motilidad si las punciones no se realizan en el mismo sitio.
Incubar durante 24 a 48 horas a 37°C en aerobiosis. Observar los resultados en este orden: motilidad, descarboxilación de la ornitina y por último revelar el indol.
Es aconsejable sacar de forma aséptica 2 ml del medio, trasvasarlo a un tubo estéril y realizar allí la prueba del indol, de manera que si da negativa se pueda incubar el resto del tubo original durante 24 horas más, para revelar nuevamente el indol.
El revelado del indol se realiza de la siguiente manera: se agregan 3 a 5 gotas del reactivo de Kovacs en el medio MIO y se agita fuertemente. Se observa si aparece o no un anillo de color rojo fucsia.
Pesar 31 gr del medio MIO y disolver en un litro de agua destilada.
Calentar hasta que hierva la mezcla durante un minuto, agitando frecuentemente hasta disolver completamente el agar. Distribuir 4 ml del medio en tubos de ensayo 13/100 con tapa de algodón.
Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar de forma recta en una gradilla, de tal manera que se forme un taco semi sólido.
Almacenar en nevera 2-8°C. Dejar atemperar antes de sembrar la cepa bacteriana.
El color del medio deshidratado es beige y el del medio preparado de color púrpura levemente opalescente.
El pH final del medio preparado es 6,5 ± 0.2
El medio se torna amarillo con pH ácido y es morado a pH alcalino.
Este reactivo se prepara de la siguiente manera:
Se miden 150 ml de alcohol amílico, isoamílico o butílico (cualquiera de los tres). En él se disuelven 10 gr de p-dimetilaminobenzaldehído. Posteriormente se agregan lentamente 50 ml de ácido clorhídrico concentrado.
El reactivo preparado es incoloro o amarillo claro. Debe guardarse en frasco ámbar y conservarse en nevera. Un color castaño oscuro evidencia su deterioro.
También el reactivo de Kovacs se puede sustituir por el reactivo de Ehrlich. Este último, por ser más sensible, se prefiere para revelar el indol en bacterias que la producen en mínimas cantidades, como en algunos bacilos Gram negativos no fermentadores y ciertos anaerobios.
Este medio es una prueba que complementa una batería de pruebas bioquímicas para la identificación de las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae.
El dato de la descarboxilación de la ornitina sirve para diferenciar a Shigella sonnei, que da positiva, de Shigella boydii, Shigella flexneri y S. dysenterieae, que dan negativas.
También diferencia el género Klebsiella, que da negativa, del género Enterobacter, donde la mayoría de sus especies dan positiva.
Cada vez que se prepare un lote de medio MIO se puede realizar una prueba control. Para ello se usan cepas conocidas o certificadas para observar el comportamiento del medio.
Las cepas que pueden utilizarse son Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes y Proteus mirabilis.
Los resultados esperados son E. coli y M. morganii. Dan M: +, I: + y O: +.
Klebsiella pneumoniae da todo negativo (M:-, I:-, O:-). Proteus mirabilis y Enterobacter aerogenes dan M:+ I:- y O: +.
- Mac Faddin J. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. 3era ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Laboratorios Britania. MIO Medio 2015. Disponible en: britanialab.com
- Laboratorios BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Disponible en: bd.com
- Laboratorios Valtek. Medio M.I.O. Motilidad, Indol, Ornitina. 2010. Disponible en: andinamedica.com