Biología

Medios de cultivos selectivos: fundamento, sólidos y líquidos


Los medios de cultivos selectivos son aquellos agares y caldos que sirven para el aislamiento de un grupo definido de microorganismos, mientras inhiben el desarrollo de otros. Son ideales para sembrar muestras polimicrobianas, permitiendo recuperar el patógeno buscado entre la microbiota acompañante.

Existe una gran variedad de medios selectivos, entre sólidos y líquidos. Algunos van destinados al aislamiento de bacterias Gram positivas, como por ejemplo Staphylococcus coagulasa positivos, Lactobacillus, Bifidobacterias, etc.

Medios de cultivos selectivos

Otros para la recuperación de patógenos Gram negativos, como por ejemplo especies de los géneros Salmonella, Shigella, Vibrio, Bordetella, Brucella, Pseudomonas, entre otros.

Así como también los hay para favorecer el crecimiento de hongos y levaduras, tales como especies de Candida, Histoplasma, Cryptococcus, dermatofitos, entre otros.

Cabe destacar que algunos medios enriquecidos no selectivos pueden convertirse en selectivos con la adición de antibióticos. Así mismo, algunos medios de cultivos pueden ser selectivos y diferenciales al mismo tiempo.

Por otra parte, existen medios de cultivos líquidos selectivos; algunos pueden servir como medios de enriquecimiento, favoreciendo la exacerbación de un grupo selectivo de bacterias, mientras suprime el de otros.

Los medios de cultivo selectivos son ampliamente utilizados en los laboratorios de microbiología para el análisis de diversos tipos de muestra; así como también para el aislamiento de una gran variedad de microorganismos de interés clínico, industrial, ambiental y alimentario.

Índice del artículo

Fundamento

Los medios de cultivos selectivos se fundamentan en contener sustancias nutritivas que favorezcan el crecimiento de una bacteria u hongo específico o de un grupo determinado de estos, y al mismo tiempo deben contener sustancias inhibidoras que no permitan el desarrollo de otros microorganismos no deseables.

Entre las sustancias nutritivas que pueden contener se encuentran: digerido pancreático de caseína, extracto de levaduras, polipeptonas, entre otros.

Entre las sustancias inhibidoras se encuentran: antibióticos, sales biliares, verde brillante, cristal violeta, fucsina básica, eosina,  azul de metileno, desoxicolato sódico, sulfito sódico, monoleato de sorbitán, citrato de amonio, cetrimida, cloruro de litio, telurito de potasio, verde de malaquita, entre otros.

En ocasiones los medios pueden ser tanto selectivos, como diferenciales. Así mismo, el grado de selectividad varía de un medio a otro.

Algunos son altamente selectivos, caracterizados por poseer condiciones extremas de hostilidad para la mayoría de los microorganismos y donde solo un pequeño número de especies son capaces de soportar las condiciones presentes en el medio y por tanto crecen satisfactoriamente. Por ejemplo, el agar TCBS y el agar MRS, entre otros.

En tanto que, otros son medianamente selectivos, es decir, aquellos que inhiben a un grupo específico de microorganismos, como por ejemplo a las bacterias Gram positivas. Por otra parte, favorecen el crecimiento de una gran variedad de bacterias Gram negativas; por ejemplo, el agar Mac Conkey.

Finalmente, existen medios de cultivos con un bajo poder selectivo, es decir, son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de bacterias entre Gram positivos y Gram negativos, así como también de algunas levaduras, mientras inhiben solo un pequeño grupo de microorganismos. Ejemplo: el agar EMB.

Medios de cultivo sólidos selectivos

Agar Baird-Parker

Medio diseñado para la detección de estafilococos coagulasa positivos (Staphylococcus aureus). Contiene como sustancias inhibidoras cloruro de litio y telurito de potasio.

Agar BCYE o agar tamponado de extracto de levadura y carbón

Es un medio de cultivo muy enriquecido, especialmente para el aislamiento de especies de Legionellas y Nocardias. Este medio se vuelve selectivo con la adición de antimicrobianos tales como polimixina B, vancomicina y anisomicina.

Agar BHI con antibióticos

El agar BHI originalmente es un medio enriquecido, pero si se le adiciona cloranfenicol y cicloheximida es ideal para el aislamiento selectivo de hongos de interés clínico.

Agar BIGGYo agar Nickerson

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento de especies de Candida. Contiene citrato de amonio, bismuto y sulfito de sodio, que actúan como inhibidores del crecimiento bacteriano.

Agar Bordet Gengou

Medio de cultivo enriquecido y selectivo, especialmente para el aislamiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertussis. Contiene cefalexina para inhibir la flora acompañante.

Agar Campy con sangre

Medio utilizado para el aislamiento del género Campylobacter. Contiene cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el crecimiento de bacterias Gram negativas, Gram positivas y hongos.

Agar Campylobacter Butzler

Medio especial para el aislamiento de especies del género Campylobacter. Está suplementado con sangre de caballo, entre otros nutrientes. También contiene diversas sustancias inhibidoras, tales como novobiocina, colistina, cefazolina, bacitracina y cicloheximida.

Agar  Campylobacter Skirrow

Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. Contiene  sangre de caballo y otros nutrientes. Como sustancias inhibidoras contiene vancomicina, polimixina B y trimetoprim.

Agar CCF o agar fructosa, cicloserina, cefoxitina

Como su nombre lo indica, contiene cicloserina y cefoxitina como sustancias inhibidoras y es utilizado para el aislamiento de Clostridium diffcile en muestras de heces, entre otras muestras intestinales.

Agar cetrimida

Medio selectivo, diseñado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa, favoreciendo la producción de pigmentos. La cetrimida (bromuro de cetil trimetil amonio) es la sustancia que inhibe el crecimiento de otras bacterias diferentes a P. aeruginosa.

Agar chocolate con isovitalex y vancomicina

Este medio originalmente es muy enriquecido. La adición de vancomicina es útil para el aislamiento selectivo de cepas de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis.

Agar CIN  o agar cefsulodina, irgasán, novobiocina

Es un medio de cultivo medianamente selectivo para el aislamiento de especies de Yersinia.

Agar CNA (colistina, ácido nalidíxico)

Es un medio selectivo especial para aislamiento de bacterias Gram positivas como Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus y levaduras, pero inhibe el desarrollo de bacterias Gram negativas como Pseudomonas y especies de la familia Enterobacteriaceae.

El agar Czapek 

Medio diseñado para el cultivo de bacterias y hongos saprófitos. Este medio contiene nitrógeno de tipo inorgánico. Por este motivo este medio se considera selectivo, pues solo podrán desarrollarse microorganismos capaces de utilizar compuestos inorgánicos como única fuente de nitrógeno.

Agar EMB

Medio ligeramente selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento de enterobacterias. Escherichia coli es especialmente detectada en este medio por el color negro verdoso brillante de sus colonias. El grado de selectividad que posee es debido a la presencia de los colorantes anilínicos (eosina y azul de metileno).

Agar Endo

Medio mínimamente selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae y a otras familias.

El sulfito sódico y la fucsina básica inhiben a la mayoría de las bacterias Gram positivas. Escherichia coli en este medio produce colonias características de color rojo oscuro con un brillo metálico verdoso tornasolado.

Agar Hektoen

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Shigella y Salmonella. Como sustancia inhibidora contiene sales biliares, suprimiendo el desarrollo de bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas.

Agar Löwenstein-Jensen

Medio especialmente diseñado para el aislamiento y desarrollo de bacterias del género Mycobacterium, especialmente la especie tuberculosis, entre otras.

El medio contiene verde de malaquita; esta sustancia inhibe la flora acompañante Gram positiva y Gram negativa que hayan podido resistir a la desinfección previa de la muestra. También contiene glicerina que estimula el crecimiento de M. tuberculosis, pero inhibe el desarrollo de M. bovis y de otros microorganismos.

Agar Mac Conkey

Es un medio selectivo y diferencial. Se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos no exigentes, fermentadores y no fermentadores de la lactosa.

Su carácter selectivo se lo proporciona la presencia de sales biliares y cristal violeta. Estas sustancias inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y algunos bacilos Gram negativos exigentes.

Agar manitol salado

Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de Staphylococcus aureus. Este medio posee una alta concentración de cloruro de sodio que inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias.

Agar SS

Medio moderadamente selectivo y diferencial para el aislamiento de los géneros Salmonella y Shigella. El medio contiene sustancias inhibidoras, tales como sales biliares, citrato de sodio y verde brillante. Estas sustancias suprimen el crecimiento de bacterias Gram positivas, ciertas bacterias Gram negativas y algunos coliformes.

Agar Regan Lowe

Agar selectivo para el aislamiento de Bordetella pertussis. El medio contiene carbón, cefalexina y anfotericina B como sustancias inhibidoras.

Agar SABHI

Medio selectivo para el aislamiento de hongos patógenos, tales como dermatofitos, Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum. Contiene cloranfenicol.

Agar sangre de caballo con bacitracina

Medio especial para el aislamiento de Haemophilus influenzae. La bacitracina inhibe la flora acompañante.

Agar sangre de caballo con carbón

Medio selectivo útil para recuperar cepas de Bordetella pertussis y B. parapertussis a partir de muestras clínicas. Contiene cefalexina para inhibir la flora acompañante.

Agar sangre kanamicina-vancomicina (KV)

Medio selectivo, especial para el aislamiento de bacterias anaerobias, tales como Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium y Veillonella.

Agar sulfito de bismuto

Medio selectivo para el aislamiento de Salmonella enterica subgrupo enterica serotipo Typhi. Este medio contiene sulfito de bismuto y verde brillante para inhibir el crecimiento de microorganismos Gram positivos y de ciertas bacterias Gram negativas.

Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares)

Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies del género Vibrio. Contiene citrato de sodio, bilis de buey y un pH alcalino que inhibe la flora acompañante.

Agar Thayer-Martin

Medio altamente nutritivo y selectivo para el aislamiento de Neisseria meningitidis y Neisseria gonorrhoeae. La flora acompañante se inhibe por la presencia de vancomicina, colistina y nistatina.

Agar verde brillante

Medio selectivo para el aislamiento de cepas del género Salmonella. Como su nombre indica, contiene verde brillante como sustancia inhibidora. Esta impide el desarrollo de las bacterias Gram positivas y un gran número de microorganismos Gram negativos.

Agar Vogel-Johnson

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial, formulado para el aislamiento de Staphylococcus aureus e inhibe el crecimiento de bacterias Gram negativas e incluso algunas Gram positivas. Las sustancias inhibidoras son el telurito de potasio, el cloruro de litio y la glicina.

Agar XLD

Es un medio selectivo y diferencial para el aislamiento de enteropatógenos Salmonella y Shigella. El desoxicolato sódico le brinda el carácter selectivo al medio.

CHROMagar (Candida Medium)

Es un medio selectivo y diferencial para ayudar al aislamiento e identificación de especies de Candida. El medio contiene cloranfenicol para inhibir el desarrollo de bacterias.

Medio Ellinghausen McCulough Johnson y Harris (EMJH)

Medio selectivo para el cultivo de Leptospiras. Contiene polisorbato 80, que inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias.

Medios de cultivo líquidos selectivos

Caldo BHI NaCL 6,5%

Caldo selectivo para recuperación de Enterococcus. La alta concentración de cloruro de sodio inhibe el crecimiento de la microbiota acompañante.

Caldo EC

Caldo selectivo para la recuperación de coliformes fecales y totales. Contiene sales biliares que inhiben el crecimiento de otros microorganismos.

Caldo GN

Caldo selectivo para la recuperación de Salmonella y Shigella. Contiene citrato de sodio y desoxicolato sódico, que inhiben a las bacterias Gram positivas y a los coliformes.

Caldo Rappaport-Vassiliadis

Es un medio de enriquecimiento selectivo de especies de Salmonella. Contiene verde de malaquita como sustancia inhibidora.

Caldo selenito

Es un medio de cultivo selectivo, útil para el enriquecimiento de muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias enteropatógenas del género Salmonella.

Como su nombre indica, contiene selenito de sodio como sustancia inhibidora, suprimiendo el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de las bacterias del tracto gastrointestinal.

Caldo tetrationato

Caldo selectivo para el enriquecimiento y recuperación de cepas del género Salmonella.

El tetrationato formado por la reacción generada entre el tiosulfato de sodio y la solución iodurada presente en el medio inhibe el crecimiento de coliformes y favorece el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa (Salmonella).

También contiene sales biliares y algunas variedades incluyen el verde brillante; ambas sustancias inhiben a la mayoría de las bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas (coliformes).

Caldo tioglicolato Campy

Caldo especial para favorecer el desarrollo de C. jejuni subsp jejuni. Contiene anfotericina B, cefalotina, polimixina B, trimetropim y vancomicina.

Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibióticos

Sirve para enriquecer las muestras y favorecer el desarrollo de Streptococcus agalactiae de secreciones vaginales. Como sustancias inhibidoras contiene  ácido nalidíxico y gentamicina o colistina.

Referencias

  1. Microbiología clínica medios de cultivo (curso 2012-2013). Disponible en: asignatura.us.es
  2. Laboratorios BD. Agar  Campylobacter Skirrow y Agar  Campylobacter Butzler. 2013. Disponible en: bd.com
  3. Laboratorios IVD. Löwenstein-Jensen. 2011. Disponible en: bio-rad.com
  4. Laboratorios Neogen. Caldo GN (Hajna). Disponible en: foodsafety.neogen.com
  5. Laboratorios BD. CHROMagar. Candida Medium 2014. Disponible en: bd.com
  6. Laboratorios BD. Rappaport Vassiliadis Broth. 2003. Disponible en: bd.com
  7. Portal Web Lifeder.com. Disponible en: Lifeder.com
  8. Laboratorios BD. Leptospira Medium Base EMJH2011.Disponible en:  http://legacy.bd.com
  9. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  10. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.