Caldo selenito: fundamento, preparación y usos
El caldo selenito es un medio de cultivo líquido selectivo. Fue diseñado por Leifson para el enriquecimiento de muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias enteropatógenas del género Salmonella.
Este medio cumple con las exigencias de la Asociación Americana de Salud Pública (APHA), y por ello es aceptado para la investigación de presencia de Salmonella en muestras de heces, orina, alimentos líquidos o sólidos, agua, entre otros.
La composición química que posee favorece la recuperación de estos microorganismos y a su vez inhibe el crecimiento de otros. Es principalmente tóxico para la mayoría de las bacterias pertenecientes a la Familia Enterobacteriaceae. Sin embargo, también permite la recuperación de cepas de Shigella y no inhibe el crecimiento de Pseudomonas y Proteus.
Está compuesto por selenito hidrógeno de sodio anhidro, fosfato de sodio anhidro, peptonas y lactosa. También existe una variante al que se adiciona cistina, de allí su nombre caldo selenito-cistina.
En la actualidad se prefiere el uso de caldo selenito-cistina, ya que se obtiene mayor porcentaje de recuperación de Salmonella equivalente al observado con otros medios selectivos con el mismo fin, tal como el caldo tetrationato de sodio.
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Las peptonas contenidas en el caldo sirven como nutrientes para el buen desarrollo de los microorganismos. Las cepas de Salmonella utilizan las peptonas como fuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos.
La lactosa es el carbohidrato fermentable, en tanto que el selenito de sodio es la sustancia inhibidora que frena el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de bacterias presentes en la flora intestinal, especialmente de la Familia Enterobacteriaceae. El fosfato de sodio es el amortiguador que estabiliza el pH del medio.
En el caso de la variante de caldo selenito que contiene L-cistina, este compuesto adicional es un agente reductor que minimiza la toxicidad del selenito, aumentando la recuperación de Salmonella.
Si se cuenta con los componentes de la mezcla se puede pesar:
4 gr de selenito hidrógeno de sodio anhidro.
10 gr de fosfato de sodio anhidro.
5 gr de peptonas.
4 gr de lactosa.
Disolver los compuestos en 1 litro de agua destilada estéril. Se puede calentar ligeramente para disolver en su totalidad.
Algunos laboratorios exponen el medio por 10 minutos en vapor fluente para esterilizarlo, ya que no debe usarse autoclave. Si se esteriliza el medio puede guardarse en nevera hasta su uso.
También se puede preparar sin esterilizar y servir directo 10 a 15 ml a los tubos de ensayo estériles.
En este caso se debe dejar reposar y usar inmediatamente. Como el medio no está estéril no puede guardarse en nevera para su uso posterior.
Si se dispone del medio comercial se pesan 23 gr del medio deshidratado y se disuelve en un litro de agua destilada estéril. Calentar brevemente para terminar de disolver. No esterilizar en autoclave. Servir asépticamente 10 o 15 ml en tubos de ensayo estériles.
El pH final del medio debe ser de 7,0 ± 0,2.
Cabe destacar que el color del medio deshidratado es beige y el preparado es ámbar claro y traslúcido.
Contiene los mismos compuestos del caldo selenito, pero se le adicionan 10 mg de cistina. El resto del procedimiento es exactamente igual al descrito anteriormente.
Este medio es especial para ser utilizado en estudios epidemiológicos, en casos donde la enfermedad no está en su etapa aguda, pacientes asintomáticos o portadores sanos.
El aislamiento del género Salmonella es por lo general difícil, pues normalmente se encuentran contaminando las muestras en forma escasa. Al estar en pocas cantidades es fácilmente solapado por el crecimiento de otros géneros bacterianos que se encuentran en mayor cantidad.
Por otra parte, la materia prima con la que se elaboran alimentos procesados a menudo son expuestos al calor, a procesos de deshidratación, al uso de desinfectantes, radiación y conservantes, entre otros.
Por tanto, las Salmonellas presentes en la materia prima son maltratadas por el sometimiento del producto a los procesos industriales antes mencionados. Así mismo, en el caso de muestras clínicas como las heces, las cepas pueden estar débiles si provienen de pacientes que han sido tratados con antibióticos.
Por ello, toda muestra en la que se sospeche la presencia de Salmonella debe ser pre-enriquecida en caldo lactosado, y posteriormente enriquecida en caldo selenito para optimizar su recuperación en los medios selectivos, tales como agar SS, agar xilosa, lisina desoxicolato (XLD), agar Hektoen entérico (HE) y agar verde –brillante, entre otros.
Para muestras de heces tomar 1 gr de muestra y suspender en un tubo con 10 a 15 ml de caldo selenito. Si las heces son líquidas tomar 1 ml y suspender en el caldo. Para hisopados rectales, descargar el material del hisopo en el caldo.
En muestras de alimentos sólidos tomar 1 gr y suspender en el caldo selenito.
En alimentos líquidos mezclar a partes iguales con el caldo selenito a doble concentración.
Para muestras de orina se debe centrifugar, descartar el sobrenadante, tomar todo el sedimento y suspenderlo en el caldo selenito.
Se incuban los caldos a 37°C por 24 horas de incubación. El crecimiento bacteriano se evidencia por turbidez. También se puede incluir un tubo adicional por muestra para incubar a 42°C. Posteriormente, sembrar medios sólidos selectivos a partir del caldo selenito.
Para control de esterilidad se incuba a 37 °C por 24 horas un caldo selenito de cada lote sin inocular. Se espera que no haya turbidez, ni cambio de color del medio.
Para el controlar el buen funcionamiento del medio se pueden usar cepas conocidas, tales como:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 y Proteus mirabilis ATCC 43071.
Los resultados esperados son:
- Para las tres primeras cepas bacterianas el crecimiento debe ser satisfactorio.
- Para Escherichia coli inhibición parcial.
- Para Proteus crecimiento moderado.
El medio caldo selenito es tóxico para la piel humana, por tanto debe evitarse el contacto directo.
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