Asa bacteriológica: características, tipos, usos
El asa bacteriológica es un instrumento de trabajo utilizado por los microbiólogos para la siembra de cultivos microbianos (bacterias u hongos). Es quizás el instrumento más usado por estos profesionales.
Su uso parece sencillo, pero en realidad requiere de mucho entrenamiento. Antes de comenzar a sembrar, el asa debe ser esterilizada en el mechero de Bunsen, tomándose luego el inóculo microbiano que puede provenir de un cultivo líquido o de un cultivo sólido.
Una vez tomado el inóculo, este puede ser depositado en un medio líquido o sembrado en un medio sólido. Después de cada procedimiento se esteriliza el asa nuevamente. El asa también sirve para realizar extendidos microbianos sobre un portaobjeto.
El asa bacteriológica tiene muchas denominaciones, entre ellas se pueden mencionar: ansa o asa de platino, asa de inoculación o asa de siembra, sin embargo su nombre real es asa de Kohle.
El material con el que se fabrica el asa es generalmente una aleación de níquel y cromo (nicrom) o también de platino. Otra variedad disponible en el mercado son las asas bacteriológicas desechables plásticas.
Por otra parte, existen varios tipos de asas bacteriológicas, cada una cumple una función dentro de las labores que ejecuta un microbiólogo. La escogencia del asa dependerá de lo que se requiere hacer.
Por ejemplo, para realizar un estriado por agotamiento con la finalidad de aislar a un microorganismo se utiliza el asa de platino que finaliza en un anillo cerrado, sin importar si es calibrada o no.
En tanto que, si es para sembrar una muestra de orina, donde es importante cuantificar las UFC, es necesario utilizar el asa calibrada. Así mismo, para inocular pruebas bioquímicas, que requieren ser sembrada por punción, es indispensable el asa en aguja. Es importante que el asa sea manipulada por un personal entrenado.
Índice del artículo
- 1 Características
- 2 Tipos
- 3 Usos
- 4 Técnicas de sembrado
- 5 Esterilización del asa bacteriológica
- 6 Referencias
Las asas bacteriológicas están constituidas por dos extremos. Un extremo corresponde al mango o base, mientras que el otro es el asa propiamente dicha.
La base sirve para agarrar el asa durante su manipulación. Por lo general es metálica, pero posee un aislante de calor para evitar que el operador se queme cuando se esteriliza la punta del asa en el mechero. Mide aproximadamente 20 cm, aunque puede ser más largos. Posee una rosca para ajustar el asa.
Es el extremo funcional, es decir, es la parte que se pone en contacto con los microorganismos y con los medios de cultivos. Consta de un fino alambre que se encuentra insertado a la base.
El asa puede ser de nicrom o platino, de allí proviene que en ocasiones se le denomine asa de platino. Mide aproximadamente 6,5 cm de largo y tiene un calibre de aproximadamente 0,20 mm. El asa con el mango puede medir 26,5 cm. Las medidas pueden variar de un fabricante a otro.
Existen varios tipos de asas bacteriológicas y cada una tiene un uso específico. Los tipos de asas son las siguientes: asa en forma de anillo calibrada, asa en forma de anillo no calibrada, asa recta o en aguja, asa espatulada, asa en forma de “L” y asa con punta aguda.
Por otra parte, las asas pueden ser de uso permanente o desechable. Las de uso permanente se esterilizan en el mechero, siendo reutilizables y muy duraderas. En tanto que, las desechables vienen estériles de fábrica, se utilizan una sola vez y se descartan.
Es el asa más usada en el laboratorio de microbiología. Sirve para tomar un inóculo de una suspensión microbiana (medio líquido) o una porción de colonia (medio sólido), para ser sembrado en otro medio de cultivo, bien sea una prueba bioquímica o un medio más enriquecido o selectivo, según sea el caso. También es útil para realizar extendidos microbianos sobre un portaobjeto.
Con este tipo de asa se puede realizar el estriamiento del inóculo inicial. Además está diseñada para que se deslice suavemente sobre el agar, sin dañarlo. Por supuesto, esto requiere de un personal entrenado que maneje la técnica de sembrado, aplicando la fuerza y los movimientos correctos para hacer un buen estriamiento.
Con esta asa se pueden ejecutar varias técnicas de sembrado. Ejemplo, los medios sólidos en placas de Petri por lo general se siembran por agotamiento (existen varias técnicas, ver video 1).
Esta técnica tiene como finalidad obtener colonias aisladas para poder estudiarlas e identificarlas, especialmente cuando la muestra es polimicrobiana, es decir, el cultivo no es puro (contiene más de un tipo de microorganismo).
En cambio, las cuñas se siembran en simple zigzag para obtener masa bacteriana, no siendo necesario en este caso aislar colonias.
En ocasiones también son usadas para tomar ciertas muestras. Por ejemplo, Rojas y colaboradores utilizaron el asa bacteriológica para tomar muestras de raspado de tejido vaginal en ratas.
Esta asa como su nombre lo indica está calibrada para tomar una cantidad específica de suspensión microbiana. Se usa cuando es necesario que el inóculo cumpla con lo estandarizado en la técnica.
Por ejemplo, es muy común para la siembra de urocultivos. En este caso se puede usar un asa calibrada de 0,01 ml y una de 0,001 ml.
Cabe destacar que, las asas calibradas tienen un margen de error, el cual varía de acuerdo al ángulo con que se tome la muestra y al tamaño de la boca del recipiente.
Si el asa de 0,001 ml se introduce en posición vertical en un recipiente de boca pequeña (≤ 7 mm), la cantidad tomada será 50% menor a la deseada.
Esto ocurre porque a menor diámetro de la boca del recipiente, mayor es la tensión superficial y por tanto, las fuerzas de adhesión entre (vidrio – líquido) aumentan. Esto genera que la carga de líquido tomada por el asa sea menor.
Mientras que, si se toma con un ángulo de 45° en un recipiente de boca ancha (≥ 22 mm) se puede recoger 150% más de la cantidad requerida. En este caso, la tensión superficial es menor y las fuerzas de cohesión vidrio/plástico disminuye, mientras aumenta la fuerza de cohesión líquido-líquido.
Por lo anteriormente expuesto, a veces se prefieren otros métodos para la cuantificación de unidades formadoras de colonia para los urocultivos.
Es también llamada asa en hilo. Se usa para inocular ciertas pruebas bioquímicas, especialmente aquellas que requieren ser sembradas por la técnica de punción. Ejemplo, medios semisólidos que se preparan en forma de taco, tales como: medio SIM, MIO y O/F.
Además en el caso de MIO y SIM que evalúan motilidad, es indispensable que la punción se realice con asa en aguja, ya que la interpretación de una motilidad positiva se presenta cuando las bacterias crecen hacia los lados del inóculo inicial.
Una prueba inoculada con un asa con anillo puede falsear los resultados (falso positivo). Por ello, en este tipo de sembrado se debe cuidar que la punción sea única, y que al retirar esta salga en la misma dirección en la que entró.
Otra prueba que debe sembrarse con aguja a pesar de que se prepara en forma de cuña es el Kligler. En esta prueba no es recomendable que el oxígeno penetre en la profundidad del agar, ya que se requiere un medio pobre en oxígeno para que ocurran ciertas reacciones químicas. Esta asa también es usada para tocar una colonia específica con el fin de subcultivar.
La mayoría de los microorganismos dan colonias suaves y fáciles de desprender. Sin embargo, existen algunos agentes microbianos cuyas colonias son duras y secas, ejemplo las micobacterias en general y algunos hongos. En estos casos es útil utilizar el asa espatulada.
Su uso más frecuente es para hacer repiques de cultivos de hongos, especialmente mohos.
Es útil para tomar colonias muy pequeñas presentes en cultivos polimicrobianos, con el fin de poder subcultivarlas.
Vídeo 1
El asa se debe esterilizar antes y después de usar. Para esterilizar el asa bacteriológica en el mechero se procede de la siguiente manera: se debe colocar el asa en la parte alta de la llama, adoptando una posición lo más vertical posible, de tal manera de esterilizar desde la punta hacia arriba.
Cuando el fino filamento se torna color rojo vivo, se puede decir que está estéril. Para usarla se enfría y se toma la muestra elegida. (Ver vídeo 2).
Vídeo 2
- «Asa bacteriológica » Wikipedia, La enciclopedia libre. 23 jul 2019, 13:31 UTC. 18 ago 2019, 22:45. Wikipedia.
- Herrera D, López P, Duque J, Pérez L, Golding R, Hernández C. Asas metálicas calibradas para microbiólogos: Una alternativa de fabricación nacional. Soc. Ven. Microbiol.2010; 30 (1): 37-42. Disponible en: ve.scielo.org
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Rojas A, Pardo-Novoa J, Río R, Gómez-Hurtado M, Limón D, Luna F, et al. Determinación del efecto analgésico del extracto hexánico de flores de Eupatorium arsenei en un modelo de dolor agudo en rata. mex. cienc. farm. 2015; 46 (1): 64-69. Disponible en: scielo.org