Agar BIGGY: fundamento, preparación y usos
El agar BIGGY es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial. Fue diseñado para aislar y ayudar en la identificación de las principales especies de Candida. Su nombre BIGGY proviene de las siglas en inglés Bismuth Glucose Glycine Yeast.
La fórmula original fue creada por Nickerson, por ello este medio también es conocido como agar Nickerson. Actualmente está compuesta por extracto de levadura, glicina, dextrosa, citrato de amonio, citrato de bismuto, sulfito de sodio y agar.
El agar BIGGY está formulado para la diferenciación de las especies Complejo C. albicans, C. tropicalis, C. krusei y C. kefyr, pero también crecen otras especies como Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum y Saccharomyces cerevisiae.
Posee buena sensibilidad y especificidad, sin embargo, al compararlo con otros medios con función similar, este queda en segundo lugar, siendo superado por el CHROMagar. Por esta razón muchos laboratorios prefieren este último, aunque es mucho más costoso.
Debe quedar claro que el uso del agar BIGGY, así como de otros medios similares, ayudan a una identificación presuntiva rápida, pero nunca confirmatoria. Por ello, se debe contar con métodos de identificación adicionales; por ejemplo, sistemas de identificación Vitek 32 y API 20.
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El agar BiGGY es considerado un medio parcialmente selectivo para el aislamiento de levaduras, especialmente del género Candida, aunque pueden crecer otros géneros.
También es un medio diferencial porque dependiendo de la especie involucrada se observarán características distintas en cuanto aspecto, color, forma y tamaño. Es considerado un medio cromogénico, por el desarrollo de colores diversos en las colonias.
El color que presentan las colonias de las levaduras se debe a la presencia de sulfito de bismuto en el agar. Nickerson se dio cuenta de que las levaduras del género Candida realizan una reducción extracelular del sulfito de bismuto, transformándolo en sulfuro de bismuto (sustancia insoluble de color negro). Esto origina colonias entre marrón claro a negro.
Este agar contiene extracto de levadura y dextrosa, lo que proporciona la fuente de nutrientes básicos y energía para el desarrollo de las levaduras. La glicina es un estimulante del crecimiento de las levaduras, en tanto que inhibe el desarrollo de ciertas bacterias.
En este mismo sentido, el citrato de amonio y bismuto, así como el sulfito de sodio actúan como inhibidores del crecimiento bacteriano. El agar es el agente que le brinda la consistencia sólida al medio.
Pesar 45 gr del medio de cultivo deshidratado y disolver en un litro de agua destilada. Agitar y calentar la mezcla, dejando hervir por 1 minuto hasta la disolución completa. Este medio de cultivo no se esteriliza en autoclave.
Al enfriar aproximadamente a 45°C en baño de maría verter 20 ml sobre placas de Petri estériles.
El color del medio deshidratado es gris amarillento y preparado es un gel color blanco amarillento, en el que puede observarse un leve precipitado floculante.
El pH debe quedar a 6,8 ± 0,2.
El medio preparado debe guardarse en nevera (4°C) y protegerse de la luz. Como es un medio que no se autoclava debe utilizarse lo más pronto posible. Se recomienda su uso antes de que cumpla 3 días desde su preparación.
Las placas se incuban a temperatura ambiente (25°C) por 24, 48 y 72 horas, pudiendo alargarse el tiempo de incubación hasta 5 días.
Cada especie de Candida desarrolla ciertas características que las hace distinguir una de otra. Los fabricantes del medio describen las siguientes características para cada especie:
-Complejo Candida albicans: se desarrolla en este agar como colonias lisas, redondas, color café o negras, con un ligero borde micelial. Con la salvedad de que el color oscuro no se difunde al medio.
-Candida tropicalis: las colonias brillantes, pequeñas, de color café oscuro, con centro negro y ligero borde micelial. El color oscuro se difunde hacia el medio, característica que es propia de esta especie, después de haber sido incubada durante 72 horas.
-Candida krusei desarrolla colonias de aspecto rugoso, planas, de gran tamaño, con el borde entre color café a negruzco.
-Candida parakrusei: colonias tamaño mediano, la mayoría de las veces con aspecto rugoso, planas. El color puede variar entre café rojizo oscuro brillante a café rojizo claro. El borde de las colonias presenta un micelio extenso, amarillento.
-Candida stellatoidea: desarrolla colonias medianas, planas, color café oscuro, casi negro. El desarrollo micelial es muy escaso.
Un estudio realizado por Yücesoy y Marol en el 2003, demostró que el medio CHROMagar presenta mejor sensibilidad y especificidad para la diferenciación e identificación de distintas especies de Candida que el agar BIGGY.
Para el control de esterilidad se incuban placas sin inocular a 25°C, en oscuridad por 24 a 48 horas, se espera que no haya crecimiento de ningún tipo, ni cambio de color.
Las cepas ATCC recomendadas para realizar el control de calidad del medio son:
Complejo Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. En todas ellas se espera el crecimiento tal como se describió anteriormente.
También se pueden usar las siguientes cepas:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. En las dos primeras se espera la inhibición total, pero en caso de crecer parcialmente las colonias serán color crema.
En el caso de S. aureus se espera que sea inhibida totalmente, pero si crecen de forma parcial sus colonias son blancas.
Algunas bacterias son capaces de desarrollarse en este medio e incluso pueden tornarse de color oscuro, simulando una colonia de Candida, pero al hacer un extendido de la colonia y observarlo al microscopio es fácilmente descartable.
Tabla: Características de las colonias de algunas levaduras en agar BIGGY según el trabajo de Yücesoy M y Marol S.
- Yücesoy M, Marol S. Performance of CHROMAGAR candida and BIGGY agar for identification of yeast species. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Ficha Técnica Agar BIGGY. Disponible en: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Disponible en: foodsafety.neogen.com
- Laboratorios Conda Pronadisa. Agar BIGGY. Disponible en: condalab.com
- Laboratorios BD. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. Disponible en: bd.com