Tinción simple: qué es, características, procedimiento
La tinción simple es un procedimiento de tinción rápido y sencillo en el cual se emplea un solo colorante, por eso se denomina simple. Se utiliza principalmente para determinar la morfología y la organización de las células presentes en una muestra.
Naturalmente las células no tienen color, por lo que es necesario hacerlas visibles de alguna manera cuando se observan en el microscopio.
Es importante destacar que los colorantes empleados en la tinción simple deben ser básicos con carga positiva (catiónicos), para que puedan unirse espontáneamente a la pared y al citoplasma celular.
Estas estructuras celulares están cargadas negativamente. Por esto el colorante, cargado positivamente, se ve atraído por las células y se une a estas de manera espontánea. Así, se colorean rápidamente todas las células presentes en una muestra.
Colorantes empleados en la tinción simple
Existen varios colorantes básicos que se pueden usar en el laboratorio de microbiología. Los más empleados son:
– Azul de metileno.
– Violeta de cristal.
– Verde malaquita.
– Fucsina básica.
Todos estos colorantes funcionan bien en las bacterias porque tienen iones de color (cromóforos) con carga positiva (catiónicos).
Los tiempos de tinción para la mayoría de estos colorantes son relativamente cortos. Generalmente oscilan entre los 30 segundos hasta los 2 minutos, dependiendo de la afinidad del tinte.
Es importante tener en cuenta que antes de teñir una muestra mediante tinción simple, esta debe ser extendida y fijada a la lámina de vidrio (portaobjeto); a la muestra extendida y fijada se le llama frotis.
Procedimiento
Paso 1
Colocar el portaobjeto sobre un estante de tinción y aplicar el colorante deseado. Dejar actuar el tiempo correspondiente.
Normalmente la tinción simple tarda unos segundos o un par de minutos, dependiendo del colorante empleado.
Observacion
En este paso es importante no excederse del tiempo recomendado para el colorante utilizado, dado que podrían formarse cristales en la lámina, produciendo lo que se conoce como “artefactos” que distorsionan la morfología de las células.
Paso 2
Lavar cuidadosamente el frotis del portaobjetos con agua destilada de una botella, o también con agua del grifo que fluya lentamente, hasta que la escorrentía se vuelva transparente. Por lo general esto tarda de 5 a 10 segundos.
Observación
No aplicar la corriente de agua directamente sobre el frotis, para evitar que la fuerza de la misma dañe la muestra.
Si no se cuenta con agua destilada, se puede utilizar agua del grifo sin problema pues no afectará el resultado de la tinción.
Paso 3
Secar el portaobjetos con toallas de papel absorbente en un solo sentido y sin frotar. Asegurarse de que la parte inferior del portaobjeto quede limpia.
Paso 4
Observar el frotis teñido en el microscopio. Comenzar por los objetivos más lejanos para ubicar adecuadamente la zona que se desea observar con más detalle. Cambiar de objetivo para acercarse cada vez más a la muestra.
Observación
Para el empleo del objetivo con mayor aumento (normalmente 100X) se debe utilizar aceite de inmersión, ya que este ayuda a que la luz penetre mejor y que la imagen se vea más nítida. No es necesario utilizar un cubreobjeto.
Paso 5
Finalmente, desechar todas las muestras en un contenedor apropiado que esté debidamente rotulado como “riesgo biológico”.
Referencias
- (2001). Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology (8 th ed.). The McGraw-Hill Companies.
- Harisha, S. (2006). An Introduction to Practical Biotechnology (1st). Firewall Media.
- Moyes, R. B., Reynolds, J., & Breakwell, D. P. (2009). Preliminary staining of bacteria: Simple stains. Current Protocols in Microbiology, (SUPPL. 15), 1–5.
- Pommerville, J. (2013). Alcamo’s Laboratory Fundamentals of Microbiology (10th). Jones & Bartlett Learning.
- Prescott, H. (2002). Laboratory Exercises in Microbiology (5 th). The McGraw-Hill Companies.
- Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Principles of Microbiology (1st). Tata McGraw-Hill Education.