Rosa de bengala: fundamento, procedimiento, control de calidad
Rosa de bengala es una prueba de laboratorio basada en una reacción antígeno anticuerpo para el diagnóstico de brucelosis. La técnica permite detectar anticuerpos específicos en contra de la bacteria Brucella abortus en muestras de suero humano. El resultado se puede reportar de forma cualitativa o semi-cuantitativa.
La forma cualitativa expresa si el paciente está positivo o negativo para la prueba, es decir, si hay o no anticuerpos. Entre tanto, el reporte semi-cuantitativo se reporta en UI/ml e indica la cantidad aproximada de anticuerpos presentes. Cabe destacar que, los anticuerpos solo se producirán si el paciente ha estado en contacto con el microorganismo.
Por su gran sencillez, alta sensibilidad y especificidad, se trata de una de las técnicas de seroaglutinación más utilizada en medicina como prueba inicial para el diagnóstico de esta enfermedad.
Algunos investigadores han comparado la eficacia de la prueba Rosa de Bengala con otras técnicas, como por ejemplo la seroaglutinación (antígenos febriles) y han observado que aunque existe buena correlación, vieron casos aislados en los que la prueba de antígenos febriles daba negativa y Rosa de Bengala positiva.
La diferencia obtenida se debió a que estos pacientes presentaban una subclase de anticuerpos IgG en contra de Brucella abortus con mejor capacidad aglutinante a pH ácido, por tanto podían reaccionar con el reactivo Rosa de Bengala pero no con el de antígenos febriles.
En este sentido, han sugerido que los reactivos de la técnica de antígenos febriles se modifique a un pH ácido para que puedan detectar este tipo de casos.
Índice del artículo
El reactivo de Rosa de Bengala consiste en una suspensión antigénica. La misma está constituida por la cepa S99 de Brucella abortus, diluida en un tampón ácido de lactato (pH 3,6), más fenol y el colorante Rosa de Bengala.
Por tanto, en la muestra lo que se busca son los anticuerpos anti-Brucella, si estos están presentes reaccionarán con el antígeno del reactivo y se observará una reacción de aglutinación macroscópicamente visible. El test detecta indistintamente anticuerpos IgM o anticuerpos IgG.
Esto quiere decir que, puede detectar la enfermedad tanto en su etapa aguda donde prevalecen los anticuerpos IgM o en su etapa crónica donde predominan los anticuerpos IgG.
Esto representa una ventaja ya que aumenta la sensibilidad de la prueba pero a la vez es una desventaja pues no discrimina entre una etapa y otra, debido a que la reacción con anticuerpos IgM e IgG son idénticas.
El test debe siempre realizarse junto a un control negativo y un control positivo. El control negativo contiene suero animal sin anticuerpos y el control positivo contiene suero de origen animal con 50 UI/ml de anticuerpos anti-Brucella.
La brucelosis es una enfermedad grave que tiende a ser crónica y peligrosa, por ello es muy importante que se diagnostique a tiempo. Es una zoonosis y el humano puede infectarse por contacto directo con material contaminado, siendo las personas más vulnerables los veterinarios y cuidadores de animales.
También se puede producir la infección por consumo de carnes crudas infectadas, entre otras formas de contagio.
Esta enfermedad ataca de forma local o sistémica. La forma sistémica es la más grave, ya que diversos órganos pueden ser afectados, entre ellos, el sistema retículo endotelial (hígado, bazo, médula ósea), piel (celulitis y linfadenopatía), sistema respiratorio (neumonía), sistema musculoesquelético (artritis, sacroileítis y espondilitis), entre otros.
La prueba de Rosa de Bengala es una técnica muy útil para realizar un despistaje inicial, debido a que es muy económica, fácil de usar y con una gran especificidad y sensibilidad.
Los casos de falsos negativos y falsos positivos son muy escasos, pudiendo ocurrir en personas con títulos de anticuerpos muy bajos ( 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 UI/ml) respectivamente.
-Kit Rosa de Bengala
-Placa de aglutinación fondo blanco
-Pipeta de 50 µl
-Rotador (opcional)
-Vortex
Los kits comerciales de Rosa de Bengala vienen con reactivos listos para su uso.
-Atempere los reactivos antes de comenzar a trabajar.
-Las placas de aglutinación tienen unos círculos dibujados, siendo cada uno para una muestra diferente. Utilice 3 círculos, el primero para el control negativo, el segundo para la muestra y el tercero para el control positivo.
-Coloque una gota o 50 µl de los controles y de la muestra en su círculo correspondiente.
-Mezcle el reactivo de Rosa de Bengala utilizando un vortex. Coloque una gota al lado de las anteriormente colocadas.
-Mezcle con palillos de madera (use uno para cada espécimen o control). Haga movimientos circulares y extiende de tal manera que abarque todo el círculo.
-Colocar la placa en un rotador automático de 80 a 100 RPM o rote manualmente por 4 minutos. Leer la prueba al culminar este tiempo.
-Verificar que los controles dieron conforme a lo esperado. Comparar la reacción de la muestra problema con los controles. Reportar como positivo si se observa aglutinación y como negativo si no hay aglutinación.
Una prueba positiva indica que el paciente posee una cantidad igual o mayor de 25 UI/ml de anticuerpos anti-Brucella.
Si en la reacción cualitativa la muestra resulta fuertemente positiva, se puede semi-cuantificar. Para ello se realizan diluciones doble seriadas de la muestra con solución salina fisiológica. Con cada dilución se realiza el procedimiento anteriormente descrito.
Se interpreta igualmente observando la aglutinación de forma macroscópica. El resultado será el título de la mayor dilución en la que se observó un resultado positivo.
Para calcular el valor aproximado de anticuerpos anti-Brucella se utiliza la siguiente fórmula:
25 UI/ml x título de la reacción= UI/ml
Ejemplo, si un paciente en la prueba semi-cuantitativa da positiva en la dilución ½, ¼ y 1/8 y comienza a ser negativa a partir de la dilución 1/16 en adelante, esto quiere decir que el paciente tiene un título de 8.
Aplicando la fórmula:
25 UI/ml x 8= 200 UI/ml
-Los kits presentan una fecha de caducidad y la misma se debe respetar. No se debe usar si el reactivo está vencido.
-Durante su uso, observar que el reactivo no contenga partículas sólidas, pues esto es signo de deterioro.
-Conservar entre 2 y 8 °C.
-No congelar, este acto daña el reactivo irremediablemente.
-Siempre realizar la prueba junto con los controles negativo y positivo.
-La técnica tolera muestras de suero con cierto grado de lipemia y hemólisis, sin embargo no es recomendable utilizar sueros exageradamente lipémicos y hemolizados, ambas condiciones alteran los resultados de la prueba.
-Siempre atempere los reactivos a temperatura de ambiente antes de comenzar el análisis.
-No interpretar reacciones que tienen más del tiempo recomendado, pues eso genera el reporte de falsos positivos, ya que después de cierto tiempo el reactivo precipita, simulando una reacción positiva.
-La técnica es 100% sensible y tiene una especificidad de 98%.
-Después de una semi-cuantificación de 1000 UI/ml hay posibilidad de observar efecto prozona (falso negativo por exceso de anticuerpo en comparación a la cantidad de antígenos).
- Rubio M, Barrio B y Díaz R. Valor de las pruebas de Rosa de Bengala, Coombs y contrainmunoelectroforesis para diagnosticar los casos de brucelosis humana en los que la seroaglutinación es negativa. Departamento de Microbiología. Servicio de Microbiología Clínica. Clínica Universitaria. Universidad de Navarra. 406-407. Disponible en: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
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