Agar Salmonella-Shigella: fundamento, preparación y usos
El agar Salmonella-Shigella también conocido como agar SS, es un medio moderadamente selectivo y diferencial, especialmente diseñado para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Salmonella y Shigella, tanto de muestras ambientales como clínicas.
El agar SS tiene una composición compleja; está constituido por extracto de carne, peptona, lactosa, sales biliares, citrato de sodio, tiosulfato de sodio, citrato férrico, agar, rojo neutro, verde brillante y agua destilada. Dada su gran selectividad se pueden sembrar muestras con abundante flora mixta.
En los laboratorios de microbiología el medio Salmonella-Shigella es muy utilizado para investigar la presencia de Salmonella y Shigella en muestras de heces diarreicas, aguas residuales, agua potable y alimentos.
En ocasiones es necesario utilizar caldos de pre-enriquecimiento (caldo lactosado) y enriquecimiento (caldo selenito cistina) para recuperar cepas de Salmonella.
Estos pasos son requeridos cuando se sospecha la existencia de Salmonella en muy baja cantidad, o donde la cepa pueda estar maltratada por procesos propios de la producción industrial, principalmente de alimentos procesados. También es aconsejable enriquecer muestras de heces provenientes de pacientes que han sido tratados con antibióticos.
Posteriormente, el caldo enriquecido se puede sembrar en agar Salmonella-Shigella y en otros medios similares, como el agar xilosa, lisina desoxicolato (XLD) y agar Hektoen entérico (HE).
Índice del artículo
Cada componente del medio de cultivo Salmonella-Shigella posee una función específica, y el conjunto de la mezcla le brinda las propiedades que lo caracterizan.
El extracto de carne y la peptona (digerido de caseína y de tejido animal) proporcionan los nutrientes requeridos (nitrógenos, carbono y vitaminas) para el desarrollo de los microorganismos capaces de tolerar el resto de los componentes.
El agar-agar es el encargado de brindar la consistencia sólida al medio.
Este medio es altamente selectivo debido a que contiene sales biliares, citrato de sodio y verde brillante. Por ello, inhibe el crecimiento de todas las bacterias Gram positivas y de la mayoría de los bacilos Gram negativos, incluyendo algunos coliformes.
Mientras que las bacterias del género Salmonella y algunas cepas de Shigella si soportan estos compuestos.
Principalmente, el género Salmonella es muy resistente a las sales biliares, tanto que son capaces de vivir en la vesícula biliar de algunos pacientes portadores que expulsan la bacteria constantemente por las heces.
La lactosa es el carbohidrato fermentable que ayuda a diferenciar las cepas fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Esta propiedad es evidenciada por la presencia del indicador de pH, que en este medio es el rojo de fenol.
Las cepas fermentadoras de lactosa dan colonias rojas, mientras que las no fermentadoras son incoloras. Esta característica es importante, ya que Salmonella y Shigella no fermentan la lactosa.
Por otra parte, este medio contiene tiosulfato sódico como fuente de sulfuro y citrato férrico como fuente de hierro. Ambos compuestos logran diferenciar a las bacterias capaces de producir sulfuro de hidrógeno. Estas reaccionan para formar un precipitado negro de sulfuro férrico insoluble y visible.
Esta propiedad la tienen algunas cepas del género Salmonella. Normalmente sus colonias son planas incoloras con un punto negro en el centro de la misma. El resto de las Salmonellas no producen H2S y se desarrollan como colonias incoloras.
Por otra parte, las colonias del género Shigella son planas incoloras sin ennegrecimiento.
Este medio es muy sencillo de preparar.
Pesar 63 gr del medio comercial deshidratado y disolver en un litro de agua destilada. Calentar la disolución y agitar. La mezcla puede llegar hasta la ebullición hasta durante minutos.
Este medio no debe autoclavarse. Después de su disolución se sirve directamente sobre placas estériles sencillas o dobles.
Al solidificar se ordenan de forma invertida en plaqueros y se guardan en nevera (2-8°C) hasta su uso.
El medio después de preparado debe quedar a pH 7,2 ± 0.2 y con color rojo naranja.
Es importante dejar atemperar las placas antes de sembrar las muestras. Se puede sembrar directamente la muestra original, descargando material en una parte del agar y luego a partir de allí estriar por agotamiento.
En caso de usar caldos enriquecidos, pasar una porción del caldo selenito y sembrar con espátula de drigalski.
Se incuba a 37°C durante 24 horas en aerobiosis.
Hay que tener en cuenta que la cantidad de gramos a pesar y el pH final del medio pueden variar de una casa comercial a otra. El embase del medio siempre trae las indicaciones para su preparación.
Se usa frecuentemente en el análisis de coprocultivos y en el estudio microbiológico de muestras de agua residuales, aguas de consumo y alimentos.
Frecuentemente se preparan placas dobles, en un lado se coloca agar Salmonella-Shigella y en el otro agar XLD.
-Algunas cepas de Shigella no crecen en este medio. Por tanto, no se recomienda para aislamiento primario de este género.
-No toda colonia transparente con centro negro es indicativo de Salmonella; deben realizarse pruebas bioquímicas para hacer una correcta identificación, ya que las colonias de algunas cepas de Proteus son indistinguibles de las de Salmonella.
-El medio deshidratado debe cuidarse de la exposición al ambiente, ya que es muy higroscópico. Por tanto, debe mantenerse en ambiente seco y bien cerrado. Abrir por períodos muy cortos.
-Con el tiempo las sales biliares del medio pueden precipitar, formando una imagen similar a un enmarañado dentro del agar, pero esto no afecta los resultados.
-Algunas cepas de Shigella pueden fermentar de forma lenta la lactosa.
Para probar que el medio está funcionando correctamente, es recomendable sembrar cepas controles conocidas o certificadas y observar si el crecimiento cumple con las características esperadas.
Para ello se pueden utilizar cepas de E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.
Los resultados esperados son:
Escherichia coli —————————-colonias convexas rosadas.
Enterobacter y Klebsiella—————— colonias grandes y mucoides rojas o rosadas.
Shigella flexneri —————————-colonias planas trasparentes o incoloras.
Salmonella typhimurium —————— colonias incoloras con centro negro.
Enterococcus faecalis———————- inhibición total.
- Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo. Salmonella-Shigella agar. 2009. Disponible en: f-soria.es
- Laboratorio BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Disponible en: bd.com
- Laboratorios Britania. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Disponible en: britanialab.com
- Valtek diagnostics. Agar Salmonella-Shigella (Agar SS).2010. Disponible en: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico Microbiológico. 5ta ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.