Agar sulfito de bismuto: fundamento, preparación y usos
El agar sulfito de bismuto es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial, especialmente formulado para el aislamiento de Salmonella enterica subgrupo enterica serotipo Typhi, entre otras especies de Salmonella. Al medio se le conoce como agar BSA por sus siglas en inglés Bismuth Sulfite Agar.
La fórmula original del agar sulfito de bismuto fue creada en 1927 por Wilson y Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); este contenía sulfito de sodio, glucosa, solución de bismuto, citrato de amonio, sulfato ferroso y agar-agar.
Hoy en día se cuenta con una modificación del medio original, compuesto por extracto de carne, peptonas de carne y de caseína, indicador sulfito de bismuto, glucosa, fosfato disódico, sulfato ferroso, verde brillante y agar-agar.
Existen muchos medios para el aislamiento de especies de Salmonella, pero cuando se trata de recuperar el serotipo Typhi, el agar sulfito de bismuto presenta una notable ventaja frente a ellos, ya que en la mayoría se obtiene una muy baja o nula recuperación de este microorganismo.
Sin embargo, es necesario usar más de un tipo de medio cuando se trata de aislar enteropatógenos, debido a que el agar sulfito de bismuto resulta menos eficaz para otras especies de Salmonella y para el género Shigella, los cuales son inhibidos o se desarrollan muy pobremente en este agar.
Cabe destacar, que de todas las especies de Salmonella, el serotipo Typhi es uno de los enteropatógenos más importantes en el humano, siendo este su único reservorio. Esta serovariedad produce fiebre tifoidea, gastroenteritis, bacteriemia y septicemia.
Por este motivo es relevante incluir este agar cuando se analicen muestras de agua, heces o alimentos en donde se sospeche su presencia.
Índice del artículo
- 1 Fundamento
- 2 Preparación
- 3 Usos
- 4 Características de las colonias en el agar sulfito de bismuto
- 5 Limitación
- 6 Control de calidad
- 7 Referencias
Como la mayoría de los medios de cultivo, el agar sulfito de bismuto contiene sustancias nutritivas para promover el desarrollo bacteriano, tales como las peptonas y el extracto de carne. Así mismo, la glucosa funciona como una fuente de energía y carbono.
Ahora bien, no todas las bacterias crecerán en este medio, ya que el agar sulfito de bismuto es un medio selectivo. Este contiene compuestos que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos y de ciertas bacterias Gram negativas. Estos compuestos son: el indicador sulfito de bismuto y el verde brillante.
Por su parte, el fosfato disódico mantiene la osmolaridad y el pH del medio.
Adicionalmente, el agar sulfito de bismuto es un medio diferencial gracias a la presencia del sulfato ferroso, que evidencia la formación de H2S. El H2S formado por las bacterias reacciona con el sulfato ferroso y forma un precipitado negro insoluble claramente visible.
Finalmente, el agar-agar proporciona la consistencia sólida al medio.
Pesar 52,3 gr del medio deshidratado y disolver en un litro de agua. Calentar hasta hervir la mezcla durante 1 minuto con agitación frecuente, hasta su disolución total. No sobrecalentar demasiado. Este medio no se esteriliza en autoclave, debido a que el calor extremo daña el medio de cultivo.
Dejar enfriar a 45°C y agitar antes de servir en las placas de Petri estériles. Se recomienda realizar placas con buen grosor. Para ello se debe verter 25 ml en cada placa. Dejar solidificar. Como es un medio que no se esteriliza es normal que se sugiera su uso inmediato.
Sin embargo, un estudio realizado por D’aoust en 1977, demostró que existe una mejor recuperación de Salmonella typhimurium y Salmonella enteritidis a medida que el medio agar sulfito de bismuto se envejece, no afectándose el rendimiento para las serovariedades Typhi y Paratyphi B.
D’aoust recomienda usar las placas al día 4 de refrigeración, aunque advierte que a medida que envejece el medio disminuye la selectividad, desarrollándose con mayor facilidad cepas de Proteus vulgaris.
Es por ello que, para muestras muy contaminadas, como las heces, es preferible usar el medio recién preparado. En caso contrario usar al día 4 de su preparación. Otros autores recomiendan usar las placas al día siguiente de su preparación, almacenadas en refrigeración.
Las placas refrigeradas se deben atemperar antes de usar. El pH del medio debe quedar en 7,5 ± 0,2. El color del medio sin preparar es beige y preparado es opalescente gris verdoso.
Entre las muestras que pueden sembrarse en este medio están muestras de heces, aguas de consumo o residuales y alimentos.
Para mejorar los aislamientos se recomienda realizar un tratamiento de pre-enriquecimiento con caldo lactosado y luego de enriquecimiento con caldo tetrationato o caldo selenito cistina, antes de sembrar en el agar sulfito de bismuto.
Las placas se incuban a 35°C ± 0,2 por 24 a 48 horas, en aerobiosis.
Las colonias de Salmonella Typhi suelen verse en este agar en 24 horas con un centro negro y rodeadas de un halo verde brillante. Mientras que, en 48 horas se tornan negras completamente debido a la formación de sulfuro de hidrógeno.
Salmonella Paratyphi A presenta colonias con características variables. Después de 18 horas de incubación pueden observarse colonias negras, verdes o transparentes, con aspecto mucoide. En tanto que, a 48 horas se observan completamente negras y algunas veces con un brillo metálico pronunciado.
S. Paratyphi A tiende a ennegrecer el medio alrededor de la colonia.
Salmonella sp muestrancolonias negras o gris verdosas, con o sin brillo metálico, pudiendo ennegrecer el medio circundante o no.
Las cepas de coliformes, por lo general, son inhibidas totalmente, pero si logran crecer se desarrollan como colonias de color verde o marrón opacas y sin brillo metálico. No tiñen el medio alrededor de la colonia.
-Los inóculos muy débiles pueden originar colonias de Salmonella Typhi de color verde claro, pasando desapercibida y reportándose el cultivo como negativo.
– El agar sulfito de bismuto puede inhibir la recuperación de algunas especies de Salmonella como S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Este medio inhibe a la mayoría de las especies del género Shigella.
–S. Typhi y S. arizonae pueden dar colonias muy similares.
-Los coliformes que producen H2S tales como Proteus y Citrobacter producen colonias similares a las de Salmonella, por lo que es necesario realizar pruebas bioquímicas de identificación.
-Debe realizarse un buen estriamiento para obtener colonias aisladas; es la única manera de poder observar las características típicas de las colonias del género Salmonella.
Para el control de esterilidad se incuba una placa sin inocular a 37 °C, se espera que no haya crecimiento, ni cambio de color.
Para el control de calidad se pueden sembrar cepas conocidas tales como:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Se espera que Escherichia coli y Shigella flexneri sean inhibidas parcialmente desarrollando colonias de color marrón verdosa y marrón respectivamente. En tanto que, ambas salmonellas deben tener un excelente desarrollo con colonias negras con brillo metálico, y finalmente Enterococcus faecalis debe ser inhibido totalmente.
- Wilson, W., & E. M. McV. Blair. Use of a Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium for the Isolation of B. typhosus and B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Retrieved from .jstor.org
- D’aoust JY. Effect of storage conditions of the performance of bismuth sulfite agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2):122–124. Available in: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratorios IVD. Agar bismuto-sulfito según WILSON-BLAIR. 2009. Disponible en: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009%20(2).pdf
- Laboratorios Himedia. Bismuth Sulphite Agar. 2017. Disponible en: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico Microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G y Ybarra M. Calidad Bacteriológica de Leche Cruda de Cabra Producida en Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11(1): 45-54